摘要：目的:探索以阴、阳离子交换色谱串接组合为方式,进行高分辨率分离纯化蛋白质的可行性。方法:阴、阳离子交换示差组合色谱法,以等度洗脱方法进行的阴、阳离子交换组合色谱,以及亲和色谱的纯化结果相对比。结果:聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色法结果显示,阴、阳离子交换示差组合色谱法,具有较好的分离纯化效果。结论:以等度洗脱、pH梯度与盐梯度洗脱串接组合的阴、阳离子交换示差组合色谱是一种较好的组合纯化的方式,达到亲和色谱的纯化效果。

摘要：目的 :探讨人酸性成纤维细胞生长因子 (acidic fibroblast growth factor,a FGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人 a FGF的生物学活性。方法 :1通过 PCR法扩增人 a FGF引入点突变 ,对其密码子进行改造 ;2构建 a FGF- p ET- 2 8a重组质粒并在大肠杆菌 BL2 1 (DE3)中表达 ;3重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果 :通过 PCR扩增 ,将设计的核酸水平突变引入到 a FGF DNA中 ,使其自起始密码 ATG后的前 5 0个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变 ,成功地实现了重组人 a FGF在大肠杆菌中的高效表达 ,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加 ,原核表达的 a FGF亦具有天然生物学活性。结论 :通过对 a FGF DNA碱基进行改造 ,可大幅度提高 a FGF在大肠杆菌中的表达量 。