摘要：目的:构建针对衔接蛋白2的μ2亚单位(AP2-μ2)的短链干涉RNA(si RNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对AP2-μ2基因的干涉作用。方法:设计AP2-μ2靶向的发夹状si RNA,据此设计合成3条互补的寡核苷酸链,退火后分别连接到pSilencer3.1neo H1载体,转化扩增后进行序列测定。待转染细胞分为对照组、Scramble plasmid、AP2plasmid-1、AP2plasmid-2和AP2plasmid-3组。用脂质体转染法将3组si RNA重组质粒与阴性对照质粒(Scramble plasmid)转染大鼠心肌细胞株H9C2,通过RT-PCR法检测AP2-μ2基因表达水平的变化。结果:合成的6条寡核苷酸单链凝胶电泳显示多个电泳条带,分别退火后,产物经凝胶电泳显示形成单一条带。双链DNA模板与载体质粒连接后,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,凝胶电泳可见4300和66bp的酶切片段。DNA测序连接的核酸序列与设计序列一致,表明AP2-μ2基因的3条si RNA载体构建成功。RT-PCR检测,在AP2plasmid-1组,转染的H9C2细胞中AP2-μ2的基因表达水平较阴性对照组降低约96%。结论:成功地构建了针对AP2-μ2基因的3条si RNA载体,其中AP2plasmid-1转染细胞后可显著抑制AP2-μ2基因表达。

摘要：目的从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建表达载体,并验证目的蛋白的表达。方法根据基因全长设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pMD18T为克隆载体,构建重组质粒进行亚克隆,再以pcDNA3.1(+)为载体构建表达质粒,转染至人肝细胞系H7702,提取蛋白,采用Western Blot方法检测HPV16-L1蛋白的表达。结果从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV16型L1蛋白编码序列与Genebank报道序列高度同源,其真核表达产物与特异性抗体能够特异性结合。结论成功构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HPV16-L1,为进一步研制HPV预防性疫苗创造基础条件。

摘要：目的:从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建原核表达载体,表达并纯化蛋白用于ELISA检测。方法:根据基因序列设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pet28a为载体构建表达质粒,IPTG诱导表达蛋白,DEAE及葡聚糖凝胶分离纯化目的蛋白,将蛋白包被平底96孔板用于ELISA检测。结果:从宫颈癌临床标本克隆到HPV16型L1蛋白编码序列,其原核表达产物纯化后可用于ELISA检测。结论:成功获得人有抗原性的HPV16L1蛋白,可用于ELISA检测。

摘要：目的探讨RNA干扰沉默STAT3基因表达对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用。方法针对STAT3mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建重组质粒(pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3),转染SKOV3细胞进行体外研究;采用Western blot、实时聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学技术检测重组质粒对STAT3基因表达的作用;MTT法检测重组质粒对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导的细胞凋亡。结果 (1)免疫组织化学技术证实卵巢癌细胞株SKOV3及癌组织中STAT3呈高表达;(2)成功构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染SKOV3细胞;(3)MTT法证实重组质粒抑制SKOV3细胞的增殖,流式细胞技术证明重组质粒诱导细胞凋亡;(4)RT-PCR与Western blot分析表明,重组质粒在mRNA及蛋白质水平特异的抑制STAT3的表达;(5)STAT3基因表达的下调抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡。

摘要："雨课堂"是在"互联网+教育"背景下研发的一种线上、线下相结合的教学模式,然而单纯应用线上教学仍有一定不足。本文探讨"雨课堂+"混合式线上教学模式在《病理生理学》教学中的应用,围绕课前—课上—课后3个环节,结合腾讯会议教学互动,融合以问题为基础的学习(problem-based learning,PBL)/以案例为基础的学习(case-based learning,CBL)教学,实现课堂翻转。"雨课堂+"混合式线上教学模式通过优化教学资源,重组教学内容,完善教学设计,实现"以学生为中心"的教学理念。