摘要：目的:构建针对钙转运蛋白(CaT1)特异性干扰RNA(siRNA)及其表达载体,并检测其对CaT1基因的干扰作用。方法:设计CaT1靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSilencer3·1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染人类胃癌细胞BGC,通过RT-PCR检测CaT1基因表达水平的变化。结果:酶切鉴定与DNA测序分析证明CaT1基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CaT1基因的表达水平明显降低。结论:成功地构建了针对CaT1基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CaT1基因表达。

摘要：目的从感染人乳头瘤病毒(HPV)的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长,构建表达载体,并验证目的蛋白的表达。方法根据基因全长设计一对特异引物,用PCR的方法从宫颈癌组织DNA中获得L1基因,以pMD18T为克隆载体,构建重组质粒进行亚克隆,再以pcDNA3.1(+)为载体构建表达质粒,转染至人肝细胞系H7702,提取蛋白,采用Western Blot方法检测HPV16-L1蛋白的表达。结果从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV16型L1蛋白编码序列与Genebank报道序列高度同源,其真核表达产物与特异性抗体能够特异性结合。结论成功构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-HPV16-L1,为进一步研制HPV预防性疫苗创造基础条件。

摘要：目的研究靶向c-Myc和血管内皮生长因子（VEGF）基因的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒对人结直肠癌细胞株的影响。方法设计靶向c-Myc和VEGF的特异性siRNA。应用体内载体表达法合成其表达质粒．转染人结直肠癌细胞株Volo后．以Westernblot检测c-Myc和VEGF的蛋白表达；以MTT、流式细胞术、TUNEL染色分析、基质胶侵袭实验检测细胞增殖活性、凋亡特性、细胞周期分布及侵袭能力的改变。结果酶切及DNA测序证实c—Myc和VEGF的siRNA表达质粒均构建成功。转染细胞后，与对照组相比较。重组质粒组细胞c-Myc和VEGF的蛋白表达水平显著下调明显（均P〈0．01）。重组质粒c—Myc组、VEGF组和c—Myc加VEGF组细胞增殖抑制率分别为（59．20±5．05）％、（32．31±3．48）％和（75．81±7．89）％：细胞凋亡率分别为（40．50±4．37）％、（21．30±2．98）％和（62．59±9．66）％，均显著高于对照组[细胞增殖抑制率（6．80±1．45）％；细胞凋亡率（2．90±0．36）％；均P〈0．05]。重组质粒VEGF组和c—Myc加VEGF组的细胞侵袭率分别为（7．34±3．65）％和（2．80±1．02）％，明显低于对照组的（18．57±7．46）％（P〈0．05）。其中，重组质粒c-Myc加VEGF组细胞增殖、调亡及侵袭性的改变最为显著，明显高于另外两个重组质粒组（均P〈0．05）。结论特异性siRNA有效抑制了人结直肠癌Volo细胞c—Myc和VEGF的表达．从而抑制了肿瘤细胞的增殖活性和侵袭性．并诱导细胞凋亡．两者具有协同作用。

摘要：目的通过RNAi沉默AP2-μ2亚单位的表达,观察其是否影响AT1R介导的AngⅡ内吞。方法通过设计构建的AP2-μ2 RNAi表达载体,转染H9C2细胞,通过Western印迹验证沉默效果;激光共聚焦显微镜观察沉默AP2-μ2基因对AT1R介导的AngⅡ内吞的影响。结果蛋白质水平检测siRNA重组质粒对AP2-μ2蛋白表达的影响,可见pSH1Si-AP2 plasmid-1表达质粒可明显抑制AP2-μ2蛋白表达。给予AngⅡ不同时间点,可见其在15min时受体内吞至胞内数量最多。重组质粒沉默AP2-μ2亚单位后,外源加入AngⅡ后,可明显抑制AT1R介导的AngⅡ内吞。结论AT1R介导AngⅡ内吞的发生,与其他GPCR一样,主要通过网格蛋白依赖的内吞方式进行,并且需要AP2蛋白参与。