摘要：目的:采用合适的裂解液和沉淀方法提取乳腺癌组织蛋白质,获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。方法:通过不同全细胞蛋白质裂解液和不同沉淀方法提取组织全蛋白的效果比较,设计了不同的蛋白质样品制备的方法,并对2-DE的条件进行优化。结果:确定了适合乳腺癌实体瘤组织的裂解液配方(LS IV),PEG沉淀的蛋白分布较完整,沉淀效率相对较高。结论:本方法可以应用到乳腺癌组织的蛋白提取,也可对其它组织蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。

摘要：目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件。方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA。利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实。结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合;测序结果,UCPs嵌合体基因序列、突变体基因序列与预期设计完全相同。结论:成功地构建了含有UCPs嵌合体和突变体基因重组真核表达质粒。

摘要：本文围绕教科书的知识点,建立以学生认知为基础的知识讲解体系,优化课堂理论教学模式,解决学生认知中理论知识点与实际应用的差异性思维;采取网络常用的微信调查问卷方式,以相关知识点为核心设计题目并精简题目数量,在课前或课间休息时展示给学生,进行短时间解答,了解学生对相关知识的掌握程度,并在此基础上调整教学模式。基于对学生认知的理解程度进行课堂设计,可以促进学生积极主动地思考知识为何而来,提升他们进一步研究的兴趣。