摘要：目的构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索EZH2基因的作用的研究做准备。方法根据EZH2 mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究EZH2基因在肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。

摘要：目的研究小干扰RNA(siRNA)对人黑色素瘤A375细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用及对癌细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向人VEGF基因的siRNA,通过脂质体转染到A375细胞中。RT-PCR检测siVEGF对VEGF基因表达的抑制作用;MTT法检测siVEGF对癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测siVEGF诱导细胞凋亡的作用。稳定转染的肿瘤细胞株接种于裸鼠皮下,观察肿瘤细胞成瘤情况。结果转染siVEGF1和siVEGF2组VEGF mRNA表达水平与空白对照组比较分别下调了59.92%和69.63%,转染阴性对照质粒组VEGF基因表达水平都无明显改变。转染siVEGF1和siVEGF2的细胞增殖受到抑制,增殖抑制率具有时间依赖性,细胞的凋亡率分别为33.8%和41.1%。转染SiVEGF2的A375细胞成瘤率平均为66.7%和50%,而对照组成瘤率均为100%。结论构建的siRNAVEGF能有效抑制人黑色素瘤A375细胞增殖及成瘤率,诱导其凋亡,其机制可能与其特异性有效下调VEGF基因的表达有关。

摘要：目的设计漏斗形生物降解材料输尿管内支架,探讨该支架在上段输尿管梗阻治疗中应用的可行性。方法制备己内酯丙交酯乙交酯三元共聚材料(PCLGA 20:60:20),并加工成漏斗形支架管。雄性家犬4只,体重12-15 kg,通过手术方法建立输尿管上段不完全梗阻动物模型;在此基础上行输尿管狭窄段切除吻合术,术中留置漏斗形PCLGA支架管支撑引流;术后定期行IVU检查,并于术后12周行术侧输尿管组织病理学分析。结果4只犬成功建立输尿管上段梗阻动物模型。漏斗形PCLGA支架管内引流效果良好,肾盂及输尿管扩张积水逐渐缓解;6-8周支架管密度减低,陆续发生断裂,断裂的支架管并未造成输尿管梗阻;术后12周支架管完全降解并排出体外,吻合段输尿管无狭窄,造影剂通过顺畅,局部组织病理学改变轻微,仅见移行上皮细胞增生和固有层增厚。结论漏斗形PCLGA支架管生物相容性良好,降解时间适宜,在上段输尿管手术中具有良好的内引流效果。

摘要：目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因沉默对在前列腺癌PC-3细胞的作用。方法培养PC-3细胞至对数生长期,随机分为质粒转染组和质粒空白组。针对AQP1基因设计合成小片段RNA,并构建高效表达载体。利用转染试剂LipofectamineTM2000用脂质体介导的基因转染技术将质粒转染入PC-3细胞。RT-PCR检测PC-3细胞AQP1 mRNA的表达情况及激光共聚焦观察室观察、拍照AQP1表达的情况,转染后72 h。将鼠龄为6 w的60只BALB/c(nu-/nu-)雄裸鼠随机分成两组,其中对照组30只,转染组30只。转染组把转染后的前列腺癌PC-3细胞注射裸鼠腋窝处皮下(对照组把未经转染的前列腺癌PC-3细胞注射到裸鼠腋窝处皮下)。每日观察肿瘤生长及体重情况,裸鼠饲养6 w处死,完整取出移植瘤瘤体测量体积和重量。结果与质粒空白组相比,转染组应用RNA干扰技术后AQP-1在前列腺癌PC-3细胞系中mRNA的水平降低,与对照组相比,转染组裸鼠移植瘤体积为(573.39±175.24)mm3明显小于对照组(1 482.50±327.86)mm3(P=0.03)。转染组肿瘤重量为(0.55±0.11)g明显小于对照组〔(1.31±0.29)g,P=0.027〕。结论 AQP-1广泛的表达在正常前列腺组织和前列腺癌组织中,对内环境稳态起着重要的作用。更多的AQP-1促进了前列腺癌细胞的增长,抑制AQP-1的表达可以使前列腺癌移植瘤生长减慢,体积减小。

摘要：目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 Hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 Hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 Hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 Hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。

摘要：目的构建靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索HIWI基因的作用的研究做准备。方法根据HIWI mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究HIWI基因在干细胞和肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。

摘要：探讨生物降解材料丙交酯/乙交酯共聚物(PLGA80:20)输尿管内支架的可行性,以16只家犬为实验动物,一侧输尿管施以离断吻合术,将PLGA支架管植于输尿管吻合局部支撑引流,分别于术后2、4、6、8及12周行静脉肾盂分泌造影检查,并取术侧输尿管行组织病理学分析。得到以下结果(1)10只实验动物术后支架管引流效果良好,支架管(6-8)周完全降解,术后肾盂分泌造影检查显示术侧肾盂、输尿管形态正常,无显影延迟;输尿管病理学改变轻微,主要镜下改变为移行上皮增生和固有层增厚。(2)3只实验动物术后早期支架管引流效果良好,(6-8)周时一度出现术侧肾盂及中上段输尿管扩张积水、显影延迟,在术后12周缓解;输尿管病理学改变轻微。(3)2只实验动物术后早期即出现支架管移位,最终输尿管吻合处不同程度狭窄;解剖术区输尿管粘连,管腔变窄,管壁增厚;组织病理学检查发现输尿管全层炎症反应严重。(4)1只实验动物术侧肾盂输尿管始终不显影;解剖发现输尿管吻合口尿外渗,周围形成尿性囊肿。证明PLGA材料支架管生物相容性良好,降解时间适宜,尿液内引流效果尚可,但有关支架管的外型设计、固定方式等尚需进一步研究和改进。

摘要：2016年我国在国家重点研发计划“精准医学研究”重点专项中发布国家百万自然人群队列建设项目,建设七大区域自然人群队列。东北地区作为我国区域划分七大地区之一,气候特征显著、膳食习惯独特且人口老龄化严重,其慢性非传染性疾病负担居全国前列。因此,建立东北区域大型自然人群队列,系统探寻疾病发生和预后相关区域特色暴露因素,为建立东北地区疾病预防新策略、降低国家医疗负担、提升东北地区人口健康水平,具有重要意义。2018年7月,东北区域自然人群队列现场工作启动,现场工作内容主要包括对参与者进行问卷调查、体格检查,以及血、尿、粪便样本的采集和检测,截至目前,队列总计完成各年龄层共115414人的基线数据收集工作。本文简要介绍了东北区域自然人群队列建设概况,为国内相关研究提供参考。