摘要：目的探究全身亚低温联合人脐带血间充质干细胞(hCMNCs)移植改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后认知障碍和能量衰竭的机制。方法7日龄新生SD乳鼠330只。随机分为11组,每组30只。空白对照组(A组)、HIBD常温组(B组)、HIBD亚低温持续72 h组(C组)、HIBD亚低温24 h干细胞移植组(D组)、HIBD亚低温48 h干细胞移植组(E组)、HIBD亚低温72 h移植组(F组)、HIBD亚低温24 h后持续3 d移植干细胞(G组)、HIBD 24 h干细胞移植组(H组)、HIBD 48 h干细胞移植组(I组)、HIBD 72 h干细胞移植组(J组)、HIBD 24 h、48 h、72 h干细胞移植组(K组)。乳鼠生长的第10天、第21天和第35天对其进行称重;通过Morris水迷宫实验检测乳鼠学习和记忆能力,超微电镜观察分析乳鼠脑组织神经元细胞及突触超微结构的变化,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测乳鼠脑组织炎症因子和干细胞分化标记蛋白含量,免疫荧光染色检测脐带CD24和CD29阳性表达率,荧光显微镜测量线粒体膜电位。结果A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K组乳鼠生长第10天、第21天和第35天体重比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点乳鼠体重有差异(F=13.285,P=0.000),各组乳鼠第21天与第35天体重比较,差异有统计学意义(P0.05);③各组乳鼠体重变化趋势有差异(F=28.712,P=0.000)。C~F组3种反射(悬崖调转反射、阴性趋地性、步态反射)时间较A组延长(P0.05);C~F组3种反射时间较G~K组延长(P<0.05)。HE染色结果显示,与A组比较,B~K组乳鼠HIBD模型复制成功后第3天,脑间质水肿,小血管间隙增宽,左侧大脑出现大片坏死,细胞溶解、破坏、消失;皮质海马神经元排列紊乱,核固缩、崩解,细胞浓染,并见小胶质细胞。第21天,B~K组与A组有差异,B~K组脑组织见不同程度的损伤,其中B组可见大的梗塞灶及液化空洞形成。C~K组表现为部分炎症细胞;B组与C~K组比较,脑损伤程度较大。其中G、J、K组脑损伤及炎症程度较C~F、H、I组小。B~K组逃避潜伏期较A组延长(P<0.05),G、J、K组逃避潜伏期较B~F、H组缩短(P<0.05)。B~K组神经元致密区长度较A组变短(P<0.05),厚度较A组变薄(P<0.05),而突触间隙宽度较A组变厚(P<0.05)。C~K组乳鼠神经元致密区长度较B组变长(P<0.05),厚度较B组变厚(P<0.05),突触间隙宽度较B组变薄(P<0.05)。G~J组乳鼠神经元致密区长度较D~F、K组变长(P<0.05),厚度较D~F、K组变厚(P<0.05),突触间隙宽度较D~F、K组变薄(P<0.05)。A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K组乳鼠HIBD模型复制成功后第3天、第8天、第12天的TNF-α、IL-6、Nestin、TUBB、MBP比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点TNF-α、IL-6、Nestin、TUBB、MBP有差异(F=39.451、19.754、36.957、16.794和16.958,均P=0.000);②各组乳鼠TNF-α、IL-6、Nestin、TUBB、MBP有差异(F=10.719、10.159、43.271、5.947和11.217,P=0.000、0.000、0.000、0.012和0.000);B~K组TNF-α、IL-6在HIBD模型复制成功第3天、第8天和第12天较A组升高(P<0.05),C~K组TNF-α、IL-6较B组降低(P<0.05)。C~K组Nestin、TUBB和MBP较B组升高(P<0.05)。③各组乳鼠TNF-α、IL-6、Nestin、TUBB、MBP变化趋势有差异(F=22.678、25.483、6.597、20.159和20.154,P=0.000、0.000、0.003、0.000和0.000)。A~C组CD24和CD29阳性表达率较E~K组降低(P<0.05),G、I组较H、J、K组CD24和CD29阳性表达率升高(P<0.05)。B~K组线粒体膜电位较A组降低(P<0.05),C

摘要：目的:探讨应用新兴基因编辑技术规律性成簇的间隔短回文重复序列-核酸酶系统(CRISPR-Cas9)对人体内2个抑癌基因p53与PTEN进行编辑的可行性,并通过体外检测研究其编辑效果,为原代细胞向肿瘤细胞转化及建立人源化小鼠肿瘤模型提供实验研究工具。方法:序列分析确定p53及PTEN基因各亚型mRNA剪辑的共同外显子区域,针对该区域进行软件评分,设计选择针对p53及PTEN基因的CRISPR-Cas9导向RNA(sgRNA)靶点各2个,即p53-1、p53-2、PTEN-1和PTEN-2。构建共表达sgRNA与Cas9-P2A-GFP的CRISPR-Cas9质粒。选择处于对数生长期的293T细胞,将其分为对照组(未转染质粒的野生型293T细胞)和实验组(利用Lipofectamine 2000转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP共表达质粒的293T细胞),流式细胞术分选实验组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞(成功转染质粒的细胞),2周扩增培养后提取基因组DNA,PCR扩增基因组DNA包含突变位点的区段,将扩增产物凝胶电泳后胶回收,连接至pEASY-Blunt Zero克隆载体中,转化,挑取单克隆菌斑培养,提取质粒DNA测序,对比对照组与实验组测序结果后确定RNA介导的特异基因位点突变效率。结果:转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒的实验组流式细胞术分选后GFP阳性率高达82%,与分选前(4%)比较明显升高(P<0.05)。对分选培养后的细胞提取基因组PCR,其中包含p53突变位点的扩增片段长度均为612bp,而包含PTEN-1突变位点的扩增片段长度为667bp,包含PTEN-2突变位点的扩增片段长度为947bp。对比实验组基因测序结果与未经sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒转染的对照组野生型细胞测序结果,p53-1、p53-2和PTEN-2诱导的突变效率分别为54.5%、45.5%和33.3%。结论:针对人p53及PTEN基因设计的sgRNA p53-1、p53-2和PTEN-2能够在基因组水平较高效率地成功介导Cas9进行位点特异性的基因编辑。

摘要：高层次医学人才的培养,主要是研究生培养模式,因此,医学研究生教育质量紧密关联着中国医学人才整体储备质量的问题。医学研究生科学知识的获得和科研素质的培养,在中国现阶段主要是通过研究生教学方式实现。因此,如何提高医学研究生实验教学质量,就成为现阶段应用型医学研究生教育必须面对的问题。在研究生教学实践过程中发现,应用型医学研究生实验技术教学要做到以下几点:(1)与时俱进,把握最新的科学进展。(2)从理论到实践,了解研究方法的选择与适用范围。(3)举一反三,熟悉科学研究的关键点,根据实验目的及条件实施具体实验操作。(4)实用性与科学性相结合,采用高水平科研论文中的实例,使应用者既可了解实验设计目的、自主实验操作,又能保证研究方法的科学性。

摘要：目的了解吉林省西部牧区牧民骨质疏松和骨量减少患病情况，并探讨其可能影响因素。方法采用多阶段抽样方法，于2012年12月在吉林省西部牧区松原市前郭尔罗斯蒙古族自治县，抽取2个乡镇（查干花镇和乌兰塔拉乡），每个乡镇抽取50％的村子，以村中18岁以上养殖羊的牧民作为调查对象。采用定量超声骨密度测量仪对调查对象足跟骨进行骨密度测定；以面对面访谈方式，采用自行设计的调查表对调查对象进行问卷调查，内容包括一般人口学信息（年龄、性别、身高、体重、文化程度和婚姻等），肥胖状况[计算体重指数（BMI）]和骨质疏松相关因素等。采用χ2检验或秩和检验进行组间比较，Logistic回归多因素分析可能影响因素。结果共调查203名牧民，骨质疏松检出率为3．45％（7／203），骨量减少检出率为46．80％（95／203）。年龄350岁牧民患骨质疏松或骨量减少的风险是年龄〈40岁牧民的2．72倍[比值比（OR）=2．72，95％可信区间（C1）：1．34～5．53]；BMI18．5－〈24．0和≥24．0的牧民患骨质疏松或骨量减少的风险分别是BMI〈18．5牧民的0．21倍（OR=0．21，95％CI：0．06—0．79）和0．13倍（OR=0．13，95％CI：0．03—0．48）。性别、民族、每天饮酒量、父母骨质疏松疾病史、服用激素类药物史等因素与骨质疏松或骨量减少间相关性分析无统计学意义（P均〉0．05）。结论吉林省西部牧区牧民骨量减少检出率较高，年龄、BMI是影响骨质疏松或骨量减少患病的独立影响因素。