摘要：目的构建编码CXCR4 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)表达质粒用以筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法根据GenBank中登录的CXCR4基因的核苷酸序列,应用shRNA设计软件设计并合成4条短发卡shRNA的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。采用酶切电泳和测序方法进行鉴定。将鉴定后的CXCR4基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,24 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出目的条带,DNA测序结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-421的U251细胞CXCR4基因mRNA的转录水平下降。结论成功构建CXCR4基因shRNA表达质粒,并筛选出效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGPU6/GFP/Rac1-421。