摘要：为了建立一种特异且敏感的华支睾吸虫囊蚴SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,试验针对华支睾吸虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基1(CSCOⅠ)基因设计特异性引物,筛选最佳引物浓度和退火温度,绘制标准曲线,优化扩增体系和程序建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并评价该方法的敏感性、特异性、重复性及符合性。结果表明:最佳引物浓度为750 nmol/L,最佳退火温度为57℃。标准曲线的斜率为-3.21,截距为35.23,相关系数(R^(2))为0.9823。该方法的最低检出限为1×10^(2)copies/μL;批间和批内变异系数分别为1.53%~2.59%和0.36%~0.76%,表现出良好的重复性;仅标准阳性质粒、华支睾吸虫囊蚴及肝片吸虫出现特异性扩增曲线,具有较好的特异性;与传统压片镜检法比较符合率为96%。说明试验建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法敏感、特异、稳定,为后续开展淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴的流行病学调查提供了技术支持。

摘要：为研究日粮中不同含量的蛋白质对肉鸡生长性能、肾脏组织及相关血液指标的影响,试验采用单因素试验设计,将1200只1日龄白羽肉鸡随机分为4组,每组5个重复,每个重复60只。I组饲喂基础日粮(蛋白质含量为19%),II~IV分别在日粮中添加豆粕使粗蛋白质含量分别为22%、25%和28%,试验为期21 d,观察不同蛋白质含量对肉鸡生长性能、肾脏组织及相关血液指标的影响。试验结果表明,(1)随着日粮蛋白质水平的提高,肉鸡平均日增重(ADG)明显降低(P<0.05,P<0.01),F/G显著增加(P<0.05);(2)高蛋白质日粮显著提高了肉鸡血清中Cr和BUN的浓度(P<0.05),加重了肾脏组织损伤。(3)随着日粮中蛋白质水平的增加,肉鸡血清中MDA含量显著增加(P<0.05),GSH-Px活性、SOD活性与T-AOC含量显著降低(P<0.05),表明高蛋白质日粮打破了氧化与抗氧化系统的稳态,引起氧化应激,造成氧化损伤。

摘要：根据犬瘟热病毒N基因序列的保守区域,设计合成特异性引物,制备标准质粒,通过优化实时荧光定量PCR反应条件建立标准曲线,进行灵敏度、组内组间重复性、特异性试验。结果表明,该方法最低检出限度为2.77个拷贝,重复性、特异性良好,说明所建立的荧光定量PCR方法能够快速准确完成犬瘟热病毒检测。

摘要：本研究利用枯草芽孢杆菌固态发酵一种复方中药药渣,比较分析药渣发酵前后的木质纤维素物质和营养物质含量的变化,确定枯草芽孢杆菌对中药药渣的降解效果。同时,将发酵后的产物按一定比例添加到育肥猪的日粮中,分析其对育肥猪生长性能和腹泻发病率的影响,旨为开发中药渣作为饲料添加剂提供实验依据。结果表明,与发酵前相比,发酵后复方中药渣中粗蛋白质含量提高了59.63%(p<0.05)、粗脂肪的含量降低了52.20%、粗纤维含量降低37.50%。采用完全随机化设计,饲喂一定量中药药渣发酵产物的育肥猪,其增重效果显著。本研究为中药药渣二次饲料化利用提供一个新的方法。

摘要：[目的]分析堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列,为研制球虫疫苗提供候选抗原。[方法]根据堆型艾美尔球虫基因序列,设计合成引物,RT-PCR扩增堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因并测序。[结果]与GenBank中发表的堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列相比,堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因发生了5个核苷酸变异,两者的核苷酸序列同源性为99.47%,两者编码区的核苷酸序列同源性为99.61%。堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因ORF内有2个变异位点。其中,A185G变异导致了所编码氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸。[结论]cSZ1基因编码蛋白可以作为球虫疫苗的候选抗原。

摘要：研制弓形虫PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据GenBank公布的弓形虫MIC3基因序列,设计合成1对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性、稳定性和保存期进行研究,之后进行临床试验。该诊断试剂盒能扩增出弓形虫特异性基因MIC3片段,与猪球虫、贾第虫、猪旋毛虫和隐孢子虫无交叉反应;该检测方法最低能够检测到10个弓形虫速殖子的DNA,不同批次的试剂盒对同一样品检测和同一批次对不同样品检测,有较高的重复性和稳定性,且常温下可保存1年以上,临床应用效果显著。该检测试剂盒对弓形虫病早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。

摘要：本试验旨在研制小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据小鹅瘟和鹅病毒性肠炎基因序列,设计合成一对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保存期进行研究,之后进行临床扩大试验。该二联PCR诊断试剂盒能扩增出预期的小鹅瘟375bp核酸片段和鹅病毒性肠炎223bp核酸片段,与鸭瘟病毒、鹅副黏病毒无交叉反应;最低能检测到小鹅瘟病毒104 ELD50/mL,雏鹅新型病毒性肠炎病毒2.5×10-1ELD50;不同批次的试剂盒对同一样品检测结果一致;常温下至少可保存5个月;临床应用效果显著。该二联PCR检测试剂盒能够对小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。

摘要：为探究副猪嗜血杆菌同一血清型不同菌株间毒力相关基因的差异以及LpxC基因的遗传特性,本试验设计35种毒力相关基因的特异性引物,对副猪嗜血杆菌血清型4型的两种菌株进行PCR验证,并将两株菌株的LpxC基因连接到T5载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞中进行克隆及测序,得到921bp目的片段。在NCBI上进行比对分析,运用DNA star软件对LpxC基因进行核苷酸同源性比对,同时对LpxC基因编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:35种毒力相关基因中除SapA基因,其余34种在两个菌株中共同存在,两株HPS的LpxC基因序列与各参考菌株之间的同源性均在97%~100%之间,说明LpxC基因在副猪嗜血杆菌中保守存在。系统进化树结果显示XM1602菌株LpxC基因与SH0165菌株处于同一分支,FS0035菌株LpxC基因与ZJ0906菌株处于同一分支。同时,菌株FS0035和XM1602的LpxC基因编码的蛋白质等电点分别为5.59和5.45;该蛋白质为亲水性蛋白,无跨膜结构;二级结构包括α螺旋、伸展链、β转角和无规卷曲。结果证实,同一血清4型,两株不同的副猪嗜血杆菌菌株在毒力相关基因上存在一定的差异;LpxC基因在两个菌株中保守性较高,变异性较低。

摘要：为建立特异性强、灵敏度高、重复性好的产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法,本试验根据产气荚膜梭菌的plc基因保守序列设计合成特异性引物探针,摸索其最佳反应条件,进行灵敏性、特异性、重复性以及临床样本验证。结果表明:建立的方法具有较好的灵敏性、特异性及重复性,最低检出限度为8.26×10^(1)拷贝/μL,在8.26×10^(3)~8.26×10^(8)拷贝/μL的范围内具有良好的线性关系,同时不与其他致病菌发生交叉反应,组间及组内的变异系数均小于4%,应用比方法在采集的300份临床样品中检出24份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。说明试验成功建立了牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法,这将为牛产气荚膜梭菌的快速诊断提供技术支持。

摘要：为获得柔嫩艾美耳球虫SAG2的克隆株并在卡介苗中表达该蛋白,根据柔嫩艾美耳球虫SAG2基因序列和表达载体图谱设计特异性引物,引入HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点,RT-PCR扩增SAG2基因,连接到pMD18-T载体。双酶切后,将SAG2基因插入到大肠埃希菌-分支杆菌整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pMV361-SAG2,经电穿孔转染到卡介苗中,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析。结果成功构建了重组质粒pMD18-T-SAG2和pMV361-SAG2,SAG2在卡介苗中高效表达,表达产物能够被柔嫩艾美耳球虫阳性血清识别,表明具有良好的免疫原性,为下一步重组卡介苗对鸡球虫病的免疫保护研究奠定了基础。