摘要：为了给临床检测猪库布病毒(PKV)提供更加准确便捷的检测方法,本试验设计了1对特异性引物,扩增PKV基因组的VP0区域。在传统PCR反应体系中添加纳米金颗粒材料,优化后建立了一种方便快捷且特异检测PKV的nano-PCR方法。结果显示,该方法能特异性扩增猪库布病毒,与猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪轮状病毒、猪札幌病毒均无交叉反应。nano-PCR相对于普通PCR表现出更高的敏感性,普通PCR的最低核酸检测浓度为5.61×10^(-7)ng/μL,而nano-PCR的最低核酸检测浓度为5.61×10^(-10)ng/μL,敏感性提高了1000倍。对来自不同发病猪场30份腹泻猪的粪便和血液临床样本的检测结果显示,nano-PCR阳性检出率为23.33%(7/30),普通PCR阳性检出率为16.66%(5/30)。结果表明,本试验建立的nano-PCR方法在猪库布病毒的检测中表现出更高的特异性和敏感性,对猪库布病毒的快速诊断和检测具有重要的临床意义。

摘要：本研究以致泻性大肠杆菌(DEC)的4种毒力因子EAST1、LT、STa和STb为模板设计特异性引物并优化各项反应条件,以建立仔猪DEC的多重PCR检测方法。该方法具有较好的特异性,只对DEC产生特异性条带,对非DEC及其他病菌则呈阴性。利用所建立的多重PCR方法对吉林省各猪场采集的样本进行检测,结果表明,在测定的猪场中,携带EAST1毒力基因的阳性菌株引起的大肠杆菌感染广泛存在,携带STb毒力基因的阳性菌株次之,携带STa及LT毒力基因的阳性菌株引起的大肠杆菌感染相较于以上2个毒力因子在所测猪场中占比略低。综上所述,本方法的建立为DEC中常见毒力因子的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段。

摘要：为了提高絮凝剂的絮凝性能以提升养殖污水的处理效率,利用壳聚糖具有的絮凝特性,并依据壳聚糖与絮凝剂之间的共聚反应,设计了5种不同浓度组合基质的处理,分析了絮凝剂投加量、生物絮凝剂与壳聚糖复配比例、pH等对COD去除率的影响.结果表明:在投加量为30.0 mg/L,pH=5,生物絮凝剂与壳聚糖复配比(V/V)为21∶9时,对养殖污水COD的去除率最高.壳聚糖与生物絮凝剂复配获得的复合絮凝剂对COD,NH 3—N,BOD,SS及TP污水指标的去除率分别达到85.2%,81.0%,85.0%,58.3%和27.5%.

摘要：为了建立准确、敏感的早期快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子生物学方法,根据ASFV中p30蛋白在感染机体中早期表达的特点,设计出1对ASFV中p30基因保守序列的特异性引物,应用纳米PCR建立一种适用于早期检测ASFV的方法,并对其敏感性、特异性和临床样品检测进行研究和分析。结果显示:该纳米PCR的最低检出限为2.47×10^(3)copies/μL,而普通PCR的最低检出限为2.47×10^(4)copies/μL,表明纳米PCR的敏感性是普通PCR的10倍;同时,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒均未发生交叉反应。此外,分别应用所建立的ASFV p30基因纳米PCR和普通PCR对18份临床样品进行检测,纳米PCR的阳性率为33.33%,普通PCR的阳性率为22.22%。上述结果表明,建立的纳米PCR检测方法可以对早期感染ASFV的病猪进行快速临床检测,具有良好的敏感性和特异性,为非洲猪瘟的诊断和防控提供了一定的技术保障。

摘要：目的构建非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,并进行表达。方法根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)MGF-505-3R基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与原核表达载体pET-32A(+)连接,构建重组原核表达质粒pET-32A(+)-MGF-505-3R。对蛋白进行生物信息学分析后,将重组原核表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达6 h后,超声破碎菌体,获得的上清液经Ni-NTA亲和层析和CMSepharose FF阳离子交换层析纯化,BCA法测定蛋白产量。结果重组原核表达质粒经菌液PCR、双酶切及测序证明构建正确。MGF-505-3R蛋白为不稳定的疏水蛋白,为跨膜蛋白,蛋白二级结构由无规卷曲、α螺旋和β折叠组成为主要结构,三级结构预测结果与二级结构预测相符。表达的重组蛋白相对分子质量约为33000,BCA法测定重组蛋白产量可达19.8 mg/L。结论成功构建了MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为我国非洲猪瘟免疫血清学诊断试剂的制备及预防控制奠定了基础。

摘要：随着物联网、大数据、云计算等互联网技术越来越多的应用在农业生产领域,并在一定程度上加速了转变农业生产方式、发展现代农业的步伐。尤其是《关于积极推进“互联网+”行动的指导意见》、《国务院关于印发促进大数据发展行动纲要的通知》、《国务院办公厅关于加快转变农业发展方式的意见》等政策相继出台后,“互联网+ 农业”为现代农业发展提供了广阔的发展空间。为贯彻落实农业部优化强制免疫补助政策有关要求,进一步强化畜禽养殖经营者的强制免疫主体责任,切实做好重大动物疫病防控工作,借助“互联网+”新形式,遵循简单实用的原则,积极探索信息化管理模式推进“先打后补”工作,吉林省于2017 年开始积极构建吉林省重大动物疫病强制免疫“先打后补”信息化管理平台,实现对符合条件的规模养殖场依照我省动物强制免疫计划自行采购的疫苗给予补助。

摘要：奶牛乳房炎是指奶牛乳腺组织的各种炎症,是奶牛最常见的疾病之一,且其发病率呈上升趋势。据报道,奶牛乳腺炎的发病率约在25%~60%之间,中国的平均临床率为33.4%。研究证实,综合评估各种因素造成的损失,产奶量和牛奶质量损失占总损失的49%。根据相关统计,我国现有奶牛1400万头左右,每年因乳房炎造成的经济损失超过6亿元。

摘要：为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结果表明,本试验建立的nano-PCR方法对BCoV特异,与牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)均无交叉反应。nano-PCR的敏感性是普通PCR的100倍,普通PCR最低核酸检测量为2.24×10^(3)copies/μL,nano-PCR最低核酸检测量为2.24×10^(1)copies/μL。应用所建立的方法对采集的43份腹泻牛的粪拭子、鼻拭子、肺部组织样品进行检测,检出BCoV阳性样品17份,普通PCR检出阳性样品11份,两种方法的符合率为100%。此次建立的nano-PCR在检测牛冠状病毒时具有更高的特异性和敏感性,对临床上的快速诊断及检测具有一定的意义。

摘要：2014年,全省免疫无口蹄疫建设已经正式启动实施,计划利用两年时间全面建成.应该说,建设无疫区本身专业性、技术性强,无论从无疫区建设的顶层设计到具体工作的组织实施,还是从开展自我评估到最后国家评估认证,乃至无疫区建成后的维持运行,都必须有全面、系统的技术措施作为支撑,而这一系列技术措施的贯彻实施都必须依赖培训工作的有效开展.

摘要：为建立气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)的快速检测方法,根据Gen Bank中气肿疽梭菌细胞毒素Cct A基因序列(登录号:JQ692583.1)设计了1对引物,以气肿疽梭菌标准株C54-1全基因组DNA为模板,建立了牛气肿疽梭菌的PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性试验。结果表明,建立的气肿疽梭菌PCR检测方法扩增出的片段大小为501 bp,与Gen Bank上气肿疽梭菌的同源性达99.4%,且该方法与D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌、腐败梭菌和巴氏杆菌等病原体无交叉反应,最低检测浓度为12.30 fg/μL。结果表明,建立的PCR检测方法具有特异、敏感、高效等优点,与其他诊断方法相比更适用于气肿疽梭菌的诊断。