摘要：通过参考GenBank中羊传染性脓疱病毒的F1L基因序列设计引物,应用PCR技术的特异性扩增了羊传染性脓疱病毒JLSY04株的F1L基因片段,测序得到了该病毒F1L基因序列,并与几个参考毒株序列进行比对.实验结果表明,羊传染性脓疱病毒JLSY04株与OV/Torino株同源性最低,为96.0%,与Jilin株同源性最高,为99.4%.即该羊传染性脓疱病毒JLSY04株F1L基因与其他参考毒株间的差异较小,可作为基因工程疫苗的目的基因.

摘要：本试验旨在建立一种能快速、灵敏、特异的检测沙门氏菌的LAMP方法。据GenBank公布的沙门氏菌高度保守的STN基因序列设计引物,继而进行一系列的LAMP反应条件的优化、特异性、敏感性、稳定性、酶切试验,并将LAMP与常规PCR进行比较。结果显示,LAMP方法最佳反应温度为65℃,只扩增沙门氏菌,最低可检出浓度为101 CFU/mL,比常规PCR的最低检出浓度高1个数量级。本试验结果表明LAMP方法对沙门氏菌的检测特异性强、敏感性高、耗时短、方法简便,有望发展成为快速检测沙门氏菌的有效手段。

摘要：本研究以致泻性大肠杆菌(DEC)的4种毒力因子EAST1、LT、STa和STb为模板设计特异性引物并优化各项反应条件,以建立仔猪DEC的多重PCR检测方法。该方法具有较好的特异性,只对DEC产生特异性条带,对非DEC及其他病菌则呈阴性。利用所建立的多重PCR方法对吉林省各猪场采集的样本进行检测,结果表明,在测定的猪场中,携带EAST1毒力基因的阳性菌株引起的大肠杆菌感染广泛存在,携带STb毒力基因的阳性菌株次之,携带STa及LT毒力基因的阳性菌株引起的大肠杆菌感染相较于以上2个毒力因子在所测猪场中占比略低。综上所述,本方法的建立为DEC中常见毒力因子的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段。

摘要：【目的】非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要。【方法】根据ASFV的CP204L基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与p EASY-T5连接构建克隆载体,利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析,用T4连接酶构建重组载体pET-32a(+)-CP204L,将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态Rosetta(DE3)中,用1 mmol/L IPTG、37℃诱导表达8 h后进行SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达。【结果】生物信息学分析结果表明,P30蛋白是一种主要由无规卷曲α螺旋和β折叠组成的亲水和稳定蛋白,PCR扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE电泳验证了在24.3 ku处有潜在的P30蛋白表达。【结论】通过生物信息学软件在分子层面分析了P30蛋白的理化性质及蛋白结构,P30蛋白的表达为制备ASFV血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础。

摘要：为了提高絮凝剂的絮凝性能以提升养殖污水的处理效率,利用壳聚糖具有的絮凝特性,并依据壳聚糖与絮凝剂之间的共聚反应,设计了5种不同浓度组合基质的处理,分析了絮凝剂投加量、生物絮凝剂与壳聚糖复配比例、pH等对COD去除率的影响.结果表明:在投加量为30.0 mg/L,pH=5,生物絮凝剂与壳聚糖复配比(V/V)为21∶9时,对养殖污水COD的去除率最高.壳聚糖与生物絮凝剂复配获得的复合絮凝剂对COD,NH 3—N,BOD,SS及TP污水指标的去除率分别达到85.2%,81.0%,85.0%,58.3%和27.5%.

摘要：目的:对吉林省15个奶牛场的奶牛乳房炎进行调查并对分离的沙雷菌进行耐药情况分析,为奶牛乳房炎临床合理选择和应用抗生素药物提供依据。方法:从采集的乳液中分离菌株并进行细菌生化鉴定,将沙雷菌属菌株接种于Sensititre肉汤进行比浊,将含有细菌的肉汤接种到药敏板条每个孔内,36℃孵育24 h读取MIC测试结果。结果:经过分离鉴定得到18株沙雷菌,对阿莫西林、头孢曲松钠、甲氧苄氨嘧啶、磺胺异噁唑、四环素、头孢噻呋、头孢西丁、氨苄西林、萘啶酸、链霉素、阿奇霉素耐药率为100%;对氯霉素的耐药率为17%;对环丙沙星和庆大霉素的耐药率为39%。结论:沙雷菌虽然在临床分离率比较低,但其对常用抗生素耐药严重,应选择合适的抗生素来进行治疗。

摘要：将V13KL编码基因片段克隆到原核表达载体pET30b(+),并在目的蛋白N端设计肠激酶酶切位点,构建出pET30b(+)-VK13L重组质粒,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),优化诱导条件,使得抗菌肽得到了高效表达。经Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定,目的蛋白的相对分子质量与预期一致。结果表明,V13KL基因成功克隆并且获得表达,在诱导体系中加入1mmol/L IPTG诱导6h便可检测到蛋白表达。

摘要：为了建立准确、敏感的早期快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子生物学方法,根据ASFV中p30蛋白在感染机体中早期表达的特点,设计出1对ASFV中p30基因保守序列的特异性引物,应用纳米PCR建立一种适用于早期检测ASFV的方法,并对其敏感性、特异性和临床样品检测进行研究和分析。结果显示:该纳米PCR的最低检出限为2.47×10^(3)copies/μL,而普通PCR的最低检出限为2.47×10^(4)copies/μL,表明纳米PCR的敏感性是普通PCR的10倍;同时,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒均未发生交叉反应。此外,分别应用所建立的ASFV p30基因纳米PCR和普通PCR对18份临床样品进行检测,纳米PCR的阳性率为33.33%,普通PCR的阳性率为22.22%。上述结果表明,建立的纳米PCR检测方法可以对早期感染ASFV的病猪进行快速临床检测,具有良好的敏感性和特异性,为非洲猪瘟的诊断和防控提供了一定的技术保障。

摘要：某养殖场幼龄蓝狐(Alopex lagopus)不同程度脱水、生长停滞,剖检可见肾脏苍白肿大。取肾脏、脑组织研磨,差速离心后染色检测到典型脑炎原虫形态,大小1~2μm。肾脏石蜡切片经革兰染色、改良马松三色染色观察到大量染色虫体。肾脏研磨液提取基因组DNA,根据NCBI的脑炎原虫(Encephalitozoon cuniculi,***)基因组设计2对特异性引物,分别扩增脑炎原虫核糖体DNA内转录间隔区1(ITS1)和极管蛋白1(PTP1)的基因片段。PCR结果显示,引物ITS1和PTP1分别扩增出762 bp和1 071 bp的片段,两片段序列与脑炎原虫相应序列的相似性均为99.7%。对ITS1基因序列进行分析,鉴定为脑炎原虫基因Ⅲ型。此外,PTP1基因的系统进化树分析了该菌株(称为JL-1),与2014年辽宁LN-1株、2001年美国CDC. V282株关系最近。

摘要：为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光定量PCR分析。结果显示:在高浓度黄连生物碱作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,并且黄连总生物碱与RPF联合作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,表明黄连生物碱是RFP抗菌增效剂。本试验为结核菌抗菌增效作用机制研究奠定了理论基础。