摘要：目的研究山楂叶中黄酮类化合物的提取工艺。方法以总黄酮类化合物的提取率为指标,通过单因素试验和正交试验设计优化山楂叶中黄酮类化合物的提取工艺。结果溶剂浓度、提取温度、提取时间、提取次数对山楂叶中总黄酮的提取具有交互作用,优化出的最佳工艺条件为提取温度80℃、溶剂浓度60%、提取时间3h、提取次数3次。结论单因素试验和正交试验结果表明,所建立的模型是合理的。

摘要：采用酸性染料比色法测定紫金龙(Dactylicapnos scandens)总生物碱的含量,通过正交设计方法,以总生物碱提取率为评价指标,优化超声波辅助提取工艺。结果表明,超声波辅助提取总生物碱的影响因素大小顺序为乙醇体积分数>提取时间>料液比,用料液比为1∶9(m/V,g∶mL),90%(V/V,下同)的乙醇溶解,超声波辅助提取40 min为最佳提取工艺条件,此工艺条件下,总生物碱提取率为2.69%。

摘要：目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入*** BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB50-285+adjuvant组、HBcIsdB50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0g·L-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P0.05);且其与HBc-IsdB50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P>0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P<0.01),HBc-IsdB50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P<0.05)。结论:HBc-IsdB50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。