摘要：目的:构建基质金属蛋白酶9靶向的RNA干扰质粒载体,观察其对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶9基因表达的沉默作用。方法:实验于2004-11/2005-07在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。设计能转录小发卡结构RNA的DNA序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,以脂质体法将重组质粒导入小鼠巨噬细胞内,采用Invitrogen公司LipofectamneTM2000转染试剂进行转染。实验分为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组每孔分别加入4μL脂质体和psiSTRIKETM/基质金属蛋白酶9重组质粒2μg;阴性对照组只加2μLLipofectamneTM2000转染试剂;空白对照组则不加任何干扰因素。分别于转染前、转染24,48,72h后用反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学技术检测基质金属蛋白酶9mRNA及蛋白水平的表达情况。结果:①成功构建靶向基质金属蛋白酶9基因发夹状RNA干扰质粒载体。②实验组转染重组质粒24,48,72h后阳性细胞率与转染前相比逐渐减少(分别为70%,42%,32%,99%,P<0.01),而阴性对照组和空白对照组则差异无显著性意义。③转染小鼠巨噬细胞后,基质金属蛋白酶9mRNA蛋白表达下调。结论:构建的RNA干扰真核表达载体能明显抑制基质金属蛋白酶9mRNA及蛋白的表达,提示通过减少动脉粥样硬化斑块细胞外基质的降解,来稳定动脉粥样硬化斑块,在基因治疗方向为斑块稳定进行了新的尝试。

摘要：背景:扩张型心肌病患者血清中细胞因子明显升高,心肌组织中也有细胞因子mRNA的表达,通过高位硬膜外阻滞治疗可以阻断细胞因子参与的恶性循环,改善心功能。目的:观察扩张型心肌病患者经过高位硬膜外阻滞术治疗后白细胞介素6及可溶性白细胞介素2受体的变化。设计:病例-对照分析。单位:首都医科大学宣武医院的检验科,哈尔滨医科大学第一临床医院的检验科和心内科。对象:哈尔滨医科大学第一临床医学院心内科2001-10/2002-05的扩张型心肌病患者35例,随机分为高位硬膜外阻滞组和常规治疗组,高位硬膜外阻滞组22例,男15例,女7例;心功能Ⅱ级4例,Ⅲ级9例,Ⅳ级9例。常规治疗组13例,男11例,女2例;心功能Ⅱ级1例,Ⅲ级5例,Ⅳ级7例。同期选择本院的健康体检者21例,男13例,女8例。干预:扩张型心肌病患者分别采用高位硬膜外阻滞治疗及常规治疗,常规治疗组只采用常规治疗方法。所有患者于治疗前及治疗4周后清晨抽取空腹肘静脉血3mL,酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素6和可溶性白细胞介素2受体水平。主要观察指标:各组患者血清中白细胞介素6和可溶性白细胞介素2受体水平。结果:56例观察对象的血样均合格,全部进入结果分析。①扩张型心肌病患者血清白细胞介素6水平(13.9ng/L)明显高于健康对照组(11.22ng/L),(z=-3.072,P0.05)。高位硬膜外阻滞组治疗前后白细胞介素6水平差值(-2.04ng/L)明显高于常规治疗组(0.28ng/L),(z=3.1829,P0.05犦。结论:高位硬膜外阻滞治疗后细胞因子白细胞介素6及可溶性白细胞介素2受体水平都明显下降,而常规治疗组未见此效果,表明高位硬膜外阻滞治疗对细胞因子有良好的调节作用,优于常规治疗。高位硬膜外阻滞对细胞因子的调节作用与其阻滞效应中的全面抑制心脏交感神经,抑制交感神经对体液免疫系统的激活及阻断其恶性循环有关。

摘要：背景:高血压的心肌肥厚(cardiomyopathyhypertrophy)是对于慢性动脉压力超负荷的一种代偿反应,压力负荷持续性增高将导致心肌收缩力下降。在心肌代偿性肥厚发展为心力衰竭机制的众多研究中,心肌细胞进行性丢失日益受到重视。目的:探讨遗传性高血压及左室肥厚过程中心肌组织凋亡调节蛋白Bcl-2,Bax表达的变化及血管紧张素II1型受体(angiotensinIItype1re-ceptor,AT1R)拮抗剂缬沙坦的影响。设计:随机对照实验研究。单位:一所大学医学院心内科,一所大学医院心内科。材料:本实验在北京大学人民医院中心实验室完成。实验选用8周龄自发性高血压大鼠(SHR)30只,按随机数字法将其分为缬沙坦组和非治疗组;以8周龄Wistar鼠15只作为对照组。干预:所有动物饲养8周,取左心室组织,称质量备用。部分心肌组织置100mL/L甲醛液中固定6h后常规石蜡包埋备形态学研究。计算心脏指数。采用免疫组化、Western印迹等方法检测凋亡调节蛋白Bcl-2,Bax表达。主要观察指标:心肌细胞Bcl-2及Bax蛋白Westernblot条带吸光度(A值)扫描值及Bcl-2/Bax比值。结果:SHR心肌中存在Bax高表达,缬沙坦治疗8周后,SHR心肌组织Bax蛋白表达显著降低至接近对照组。缬沙坦组及对照组Bcl-2蛋白表达与非治疗组比较,差异无显著性意义(P<0.05)。

摘要：目的构建人重组ICOS-Linker-Ig真核表达载体并预测其二级结构及Linker的合理性。方法扩增人I-COS胞外域及IgG Fc段,设计一段柔性Linker将二者连接。经测序分析得到融合基因序列。应用核酸和蛋白质序列分析软件EditSeqTM对融合基因及Linker部位翻译后二级结构水平的一些生物学特性,诸如柔性、抗原性、亲水性及表位等加以预测分析。结果ICOS-Linker-Ig融合基因的氨基酸序列经软件分析,并分别与ICOS和IgG单独分析结果比较,发现在二级结构水平未出现新的抗原性,同时Linker部位具有很低的抗原性,亲水性无改变,Linker部位呈中性且柔性良好,不影响两端蛋白质二级结构和融合蛋白空间构象。ICOS和Ig具有各自原来的表位特征,无新表位出现。结论本研究构建的ICOS-Linker-Ig能够保留ICOS和Ig各自生物活性和功能,计算机分析表明翻译后不影响蛋白质空间结构的形成,适合融合蛋白功能的发挥。

摘要：目的构建基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)特异的RNA干扰质粒载体,为探讨抑制MMP-2表达在急性冠脉综合征治疗中的意义奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的MMP-2基因核苷酸序列,选择设计能转录小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,使用限制性内切酶PstⅠ酶切鉴定是否为阳性克隆。结果成功构建psiSTRIKETM-MMP2载体,拟进一步采用RNAi技术观察其对MMP-2基因表达的抑制情况,从而研究其在急性冠脉综合征治疗中的作用。结论MMP-2 RNAi真核表达载体被成功构建。

摘要：心脏心律失常并发许多影响心脏和循环的疾病，它们形成机制各异。科学知识的发展使人们对它们从器官、细胞和分子水平进行了了解。设计特异抗心律失常药物的结构和类型，促进了分子结构和细胞生物学发展，这些药物治疗发展的新途径令人鼓舞，主要研究探索领域是促进药物识别并适应新靶位，从分子水平到器官水平阐述了心律失常的心肌细胞基质以及离子通道、细胞、全部组织和整个器官，特别是集中于遗传因子和环境压力等因素，它们决定和影响了正常或不正常心脏电活动和／或作为长期调节因子重塑心脏结构和电基质等~([1])。