摘要：微小RNA(microRNA,miRNA)是一类含有约22个核苷酸的内源性非编码RNA,通过与靶mRNA的3′非翻译区(3′UTR)不完全性互补配对,介导转录后基因调控。人类疾病的发生和发展过程都有miRNA参与,其表达方式与疾病的诊断、分期、进展、预后及对治疗的反应程度密切相关。最近的研究表明miRNA可能成为大部分疾病的治疗靶点,随之产生基于miRNA的实验技术,结果表明这些技术不仅可以通过基因特异性方式干扰miRNA的作用,还可能为今后进一步探索其功能提供良好的研究工具。另外,新技术的应用还为以miRNA为靶点设计小分子药物应用于人类疾病的基因治疗迈出重要的一步。本篇综述首先总结miRNA与肿瘤、心律失常、心力衰竭和高血压等人类疾病发病的关系,并进而探讨其为靶点进行小分子药物设计的可行性。

摘要：目的:观察Grp78靶向RNA干扰质粒载体对人类胃癌细胞株7901 Grp78基因表达的抑制作用.方法:设计1对Grp78基因发卡寡核苷酸,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入人类胃癌细胞株7901内,分别在转染前、转染后24,48和72h通过RT-PCR、免疫荧光技术检测Grp78mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78.将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到Grp78mRNA及蛋白水平的表达明显下调,随着时间的延长Grp78在实验组中的表达逐渐降低,并随着时间推移稳定存在.阴性对照组,转染前组,转染12,48,72h组Grp78的mRNA相对表达量分别为1.069,0.972,0.662,0.408,0.420.转染后组较转染前组及阴性对照组分别具有显著性差异(P0.05).转染前后组免疫荧光表达结果统计学差异明显(P<0.001),其中转染后48h同转染后24h相比较Grp78蛋白表达明显减少(P<0.00714).结论:构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78mRNA及蛋白的表达.

摘要：全面推进健康中国建设要求我国医学人才具有更强的创新能力和更高的综合素质。科研思维是学生运用科学研究相关的方式进行思考和学习的一种能力。药理学作为医学生必修课程,是临床医学和基础医学之间的桥梁学科。文章介绍了科研思维融入药理学理论教学和实验教学的必要性及具体方法,包括在药理学理论教学中强化科研思维的概念,深化课程设置改革;在药理学实验教学中强调案例分析法与小组讨论法联合,增加学生自主实验设计占比。通过将科研思维融入药理学教学,培养学生分析问题、解决问题能力,推动创新型医学人才培养进程。

摘要：背景:在癫痫微环境神经干细胞能否被诱导分化为异常放电的"癫痫神经元"?癫痫微环境包括两种情况:一是"无镁"细胞外液,二是与癫痫细胞共培养。其中前者比后者的致癫痫作用强。目的:模型模拟体内癫痫微环境,将大鼠海马神经干细胞和正常海马神经元以及"癫痫神经元"体外共培养,观察干细胞的分化发育情况。设计:重复测量观察。单位:哈尔滨医科大学附属第一医院。材料:实验于2005-08/2007-04在哈尔滨医科大学病原学教研室及药理学教研室完成,选用150只新生Wistar大鼠,雌雄不拘,由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。兔抗鼠突触素抗体购自美国LabVision公司。携带增强型绿色荧光蛋白标记基因的血清型2型腺相关病毒购自北京本元正阳公司。Axopatch200B放大器为美国Axon公司产品。5111A示波器为美国Tektronix公司产品。方法:①分离大鼠海马神经元,采用"无镁"外液处理神经元建立"癫痫神经元"模型。常规方法培养大鼠海马神经干细胞,将绿色荧光蛋白标记的神经干细胞分别与正常海马神经元、"癫痫神经元"共培养14d。②应用膜片钳记录与两种神经元共培养后细胞突触后电位;利用免疫荧光检测神经干细胞突触素抗体染色情况;将神经干细胞分化的神经元放入"无镁"外液,应用膜片钳记录其突触后电位。主要观察指标:①海马神经干细胞与两种神经元共培养14d后突触后电位、突触素抗体染色结果。②分化后神经元在"无镁"外液中突触后电位及"癫痫样放电"情况。结果:①神经干细胞与正常海马神经元共培养后,膜片钳记录到60%(6/10)神经干细胞14次/5min兴奋性突触后电位;与"癫痫神经元"共培养后记录到12次/5min兴奋性突触后电位。②神经干细胞分别与正常海马神经元及"癫痫神经元"共培养后,免疫荧光检测均显示80%(12/15)表达绿色荧光蛋白的干细胞突触素抗体染色阳性。③60%(9/15)干细胞分化的神经元在"无镁"外液中出现14次/5min时程约10s的兴奋性突触后电位,未记录到"癫痫样放电"。结论:大鼠海马神经干细胞与"癫痫神经元"体外共培养后可形成功能性突触,未转变成"癫痫神经元"。

摘要：目的改进抗肿瘤多肽30肽纯化方法并测定其活性。方法设计并合成His标签序30肽序列,与PTYB21重组后转化到大肠埃希菌Rosetta(DE3)pLysSS菌株,再经IPTG诱导、镍离子柱纯化后经SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况,DTT裂解后G25葡聚糖凝胶层析分离30肽,测定浓度、纯度后,计算产量,MTT检测30肽抗肿瘤活性。结果重组的PTYB21-His-30肽大量地表达融合蛋白,经镍离子柱层析的纯化的30肽与传统提取方法几丁质层析方法总产量基本一致,并且具有较好的抗肿瘤活性。结论重组的抗肿瘤多肽表达载体经镍离子层析后能够纯化出理想的30肽,该纯化方法操作流程简单、节约成本,有利于抗肿瘤多肽的大规模提取。