摘要：背景:间充质干细胞由于具有自我更新能力且在适宜微环境下具有多向分化潜能,近年来已成为细胞领域的研究热点。目的:对比观察脐带血与骨髓来源的间充质干细胞其体外分离、纯化及培养条件,并对其进行生物学特性比较。设计:体外细胞学对比观察。材料:新鲜脐带血在征得产妇同意后采集。骨髓由健康的成年志愿者捐赠。方法:取脐带血和成人骨髓分离、培养并纯化间充质干细胞,对获得的间充质干细胞进行形态学观察。主要观察指标:两种来源间充质干细胞的形态和生长特性;流式细胞仪检测脐带血间充质干细胞表面抗原的表达情况;对脐带血间充质干细胞多向分化的能力进行鉴定。结果:两种来源的单个核细胞经体外培养贴壁后均出现间充质样细胞,原代骨髓间充质干细胞的贴壁时间和培养时间均短于脐带血间充质干细胞,两种细胞传代生长呈共同特性:传代培养潜伏期为24～36h,传代培养对数增殖期为接种后3～7d,接种后八九天,生长进入平台期;脐带血来源的间充质干细胞表达相关抗原CD29、CD44、CD105;但不表达造血细胞抗原CD34、CD45;脐带血间充质干细胞可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞。结论:人脐带血和骨髓来源间充质干细胞均可在体外分离培养、扩增;脐带血的间充质干细胞原代贴壁时间、形成细胞克隆的时间、集落交错融合的时间均较骨髓间充质干细胞晚,传代培养的细胞形态,生长速度均无明显差异;两种来源的间充质干细胞具有相同的表面标志物;脐带血间充质干细胞有多项分化潜能,可诱导为脂肪细胞、成骨细胞。

摘要：目的研究利用小分子干扰技术(RNAi),构建Grp78靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类卵巢癌细胞SKOV3Grp78基因表达的抑制作用。初步探讨RNA干扰技术抑制Grp78的表达作为卵巢癌基因治疗的可行性。方法从GeneBank中选取人类卵巢癌细胞Grp78基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计Grp78基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体psiSTRIKETMU6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,采用脂质体转染法将含有特异性小分子干扰Grp78 mRNA的重组载体psiSTRIKETM/Grp78导入卵巢癌细胞系SKOV3中,分别在转染前、转染后24h、48h和72h通过RT-PCR和Western blot检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞经梯度浓度紫杉醇处理后的细胞存活率。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78 RNA干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78。将上述质粒转染到卵巢癌细胞后,观察到psiSTRIKETM/Grp78能够有效的抑制Grp78 mRNA及蛋白表达。转染psiSTRIKETM/Grp78基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制,出现凋亡征象,且对化疗药物的敏感性增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达,增加卵巢癌细胞的化疗敏感性。RNAi技术抑制Grp78表达为卵巢癌的基因治疗开辟了新的思路。

摘要：卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,也是导致女性妇科恶性肿瘤相关死亡的主要原因之一。虽然包括手术和化疗在内的治疗方案取得一定疗效,但卵巢癌患者5年总体生存率仍不令人满意。一是由于多数卵巢癌早期无明显症状,诊断时已是晚期;二是归因于卵巢癌复发率及化疗耐药性的提升。降低卵巢癌患者死亡率的关键是早期诊断和治疗以及对化疗耐药的有效预测。研究与卵巢癌相关的基因和蛋白的表达模式对促进诊断相关生物标志物的产生至关重要,并为药物设计、治疗和耐药性提供新的研究靶点。近年来,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的作用日益凸显。已在包括癌症在内的许多疾病中发现lncRNA的异常表达,但其在疾病病因学和生物学的确切作用尚不清楚。随着对卵巢癌发病机制的深入研究,已有报道lncRNA的异常表达与铂类/紫杉醇耐药有关。综述近年来lncRNA在卵巢癌化疗耐药方面的研究进展。

摘要：目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA(lncRNA)FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平。结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织([15.04±2.24)vs.(2.93±0.39),P<0.05]。沉默lnc RNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强([18.38±0.73)%vs.(2.86±0.09)%,P<0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低([6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P<0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制。

摘要：目的利用RNA干扰技术,构建葡萄糖调节蛋白94(GRP94)靶向的RNA干扰质粒载体,观察其对卵巢癌细胞株HO-8910 GRP94基因表达的抑制作用及其对阿霉素(ADM)耐药的逆转作用。方法设计能转录小发卡结构RNA的DNA序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入卵巢癌细胞株HO-8910内,实验分为3组,特异性siRNA组(HO-8910/siRNA组),非特异性siRNA组(HO-8910/NC siRNA组)和空白对照组(HO-8910组),用RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测GRP94 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素化学敏感性的变化。结果成功构建RNA干扰质粒载体,转染针对GRP94的siRNA后24、48、72h,HO-8910的GRP94基因和蛋白水平明显下降;细胞凋亡增加;转染GRP94 siRNA后,HO-8910对阿霉素的敏感性显著增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显抑制GRP94 mRNA及蛋白的表达,促进细胞凋亡,通过降低卵巢癌细胞中GRP94的表达能增加其对阿霉素的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。

摘要：目的探讨虚拟仿真融合型教学方式在妇科腔镜技术选修课程中的应用效果。方法选取2021年9—11月期间2批次选修妇科腔镜技术课程的中国医科大学2018级五年制临床医学专业89名学生为研究对象,按照不同选课时间将其分为试验组和对照组。试验组46名学生采用虚拟仿真融合型教学方式,对照组43名学生采用传统教学方式。课程结束后,通过理论考试成绩、实践考核总分和教学满意度调查结果,比较两种教学方式的实施效果。结果试验组学生的理论考试成绩[(39.98±4.20)分]和实践考核总分[(42.87±1.05)分]均高于对照组学生[(37.74±5.87)分,(41.12±1.72)分],其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。教学满意度调查结果显示,试验组学生在课程设计、教学方法、教学资源、教学效果和学习体验等方面的评分均高于对照组学生,其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论虚拟仿真融合型教学方式应用于妇科腔镜技术选修课程,有助于提高学生的学习兴趣、学习主动性和学习效能;同时,仍然有待于不断完善,以更好地服务于医学人才培养和医学教育事业。