摘要：目的 观察Twist特异性小分子干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞生长作用的影响.方法 设计、合成Twist特异性siRNA,转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测细胞中Twist基因的mRNA和蛋白表达；Western blot法检测细胞浸润、凋亡相关蛋白表达；噻唑蓝（MTT）法及流式细胞术检测细胞生长及凋亡.结果 Twist-siRNA转染组与阴性对照组比较,mRNA和蛋白表达量明显降低（0.873±0.071比0.323±0.035、0.964±0.021比0.419±0.010,P＜0.05）；细胞浸润相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达增加（1.102±0.051比1.583±0.031,P＜0.05）；凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达增加（1.059±0.070比1.502±0.029,P＜0.05）；细胞生长速度明显降低；空白对照组、阴性对照组和转染组的细胞凋亡率分别为15.3％、16.1％和47.2％（P＜0.05）.结论 构建的Twist特异性siRNA能够显著下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞株Twist基因表达,降低细胞体外增殖能力及肿瘤细胞浸润能力,提高细胞凋亡率.

摘要：背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点。目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成。材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照。方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4siRNA转染组;转化生长因子β处理组;Smad4siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激。各组分别于培养24h后收集细胞。主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化。结果:Smad4siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性;Smad4siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达。结论:Smad4siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达。

摘要：背景:近来,从大动物获得大量存活的胰岛细胞技术已经日趋成熟,并且已经应用到了临床。然而大量研究表明,同小动物相比,猪胰岛细胞的收获量,还是相对过低,究其原因,是否与猪胰腺外分泌组织生化成分有关?此研究旨在为糖尿病患者提供可靠的胰岛细胞来源。目的:探讨单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制,为糖尿病患者的二级康复措施介入提供理论依据。设计:以动物为研究对象,随机对照实验研究。单位:一所大学医院的普外科和老年病科。材料:实验于2003-06/2004-05在哈尔滨医科大学附属第二医院完成。哈尔滨市哈达屠宰厂提供成年杂种活猪20头,猪龄12～24个月,体质量100kg左右。干预:屠宰放血后在相对无菌情况下,仔细取出胰腺脾部放在冷RP-MI1640液内,迅速送到实验室。快速去除胰周组织,脂肪、血管等。用1∶5000洗必泰浸泡3min,然后用冷RPMI1640液冲洗,4℃条件下在平皿中用眼科剪剪成1mm×1mm×1mm左右的碎片,均分成两份,分别放入含有单纯酶溶液和和复合酶溶液的锥形瓶中,分级消化获得胰岛细胞。主要观察指标:经双硫腙染色计数胰岛细胞,并做椎虫蓝染色测定胰岛细胞活性,胰岛素释放试验观察胰岛细胞的功能;电子显微镜对胰岛细胞团检查,检验其结构的完整性。结果:复合酶消化制备物在平均产量上?

摘要：目的构建Grp94靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类胃癌细胞株SGC-7901 Grp94基因表达的抑制作用。方法从GenBank中选取人类Grp94基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计1对Grp94基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体siS- TRIKE^(TM)U6的要求并与psiSTRIKE^(TM)质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体。采用Lipofectamne^(TM)2000转染试剂进行转染,将重组质粒导入人类胃癌细胞株SGC- 7901内,分别在转染前、转染后24、48和72h通过逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot及免疫荧光技术检测Grp94 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp94干扰质粒载体命名为psiSTRIKE^(TM)/Grp94,将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到psiSTRIKE^(TM)/Grp94能够明显下调Grp94 mRNA及蛋白水平的表达,并随着时间推移稳定存在。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKE^(TM)/Grp94能明显抑制Grp94 mRNA及蛋白的表达,提示通过降低胃癌细胞中Grp94的表达,可能抑制或辅助抑制胃癌细胞的生长的作用。

摘要：探讨胰肠端侧吻合应用桥袢式引流术临床应用效果。方法收集本院2008年6月～2010年12月期间行胰十二指肠切除术78例,其中A组胰肠端侧吻合应用桥袢式引流术21例,B组胰肠端侧吻合胰管内固定支架外引流术27例,C组胰肠端侧吻合术30例。比较三组胰肠吻合时间、腹腔引流管拔管时间、术后住院天数、胰瘘率。结果 A组患者胰肠吻合时间(23.71±1.71)min,B组为(33.78±2.45)min,C组为(31.70±2.45)min,A组与B、C两组吻合时间分别比较均有统计学差异(P<0.05)。A组拔管时间(6.86±1.06)d,B组(8.32±2.26)d,C组(9.89±2.06)d,A组与B、C两组分别比较均有统计学差异(P<0.05)。A组术后住院时间(14.43±3.53)d,B组(16.76±3.87)d,C组(18.07±3.83)d,A组与B、C两组分别比较,均有统计学差异(P<0.05)。A组胰瘘未发生,B组胰瘘率为3.7%(1/27),C组为10%(3/30),A与B、C两组分别比较无统计学差异。结论胰肠吻合时应用桥袢式引流术设计合理,操作相对简单,手术时间短,能减少腹腔引流管拔管时间,缩短住院天数,对术后胰瘘发生在一定程度上具有预防作用。

摘要：目的：调查化疗期乳腺癌患者的抑郁及焦虑情绪状态，探讨情绪状态的影响因素，促使医护人员更好的了解化疗期乳腺癌患者的情绪状态，以便更好的提供相应的护理与治疗。方法：采用自行设计的调查问卷，对2012年7～12月住院的97名化疗期乳腺癌患者进行调查，内容包括一般人口学资料、医院焦虑抑郁量表及状态一特质焦虑问卷。结果：化疗期乳腺癌患者的抑郁得分为（4．79±4．23）分，特质焦虑得分为（41．70±11．81）分，状态焦虑得分为（40．61±12．11）分，其影响因素包括教育水平和家庭人均月收入，Pearson相关分析得出特质焦虑、状态焦虑与抑郁之间存在正相关。结论：化疗期乳腺癌患者焦虑与抑郁处于较高水平，教育水平越高、家庭人均月收入越高的患者其焦虑、抑郁程度越低。医护人员可以通过对化疗期乳腺癌患者进行相应的心理疏导以减轻负性情绪的产生，以促进和保持治疗的顺利进行与疾病的转归。

摘要：背景:癫痫发作后大脑海马神经元有明显受损,而癫痫后神经细胞损害有坏死和凋亡两种形式,在癫痫神经损害中起着重要作用。腺苷作为内源性神经保护递质,可以抑制兴奋性氨基酸的释放、氧自由基的产生以及一氧化氮的作用,同时还有改善脑血流以及抗惊厥作用。但有关腺苷与癫痫后细胞凋亡之间的关系尚不完全清楚。目的:观察腺苷受体激动剂2-CAdo对癫痫大鼠海马神经细胞bcl-2,Bax基因表达的影响,进一步探讨腺苷抗惊厥及脑保护的作用机制。设计:以实验动物为研究对象,完全随机对照实验研究。单位:一所油田总医院的儿科和普外科,一所大学医院儿内科。材料:实验于2002-10/2003-03在哈尔滨医科大学实验动物学部及病理教研室完成。体质量200～250g健康成年Wistar大鼠104只,雌雄各半。动物随机分为正常组8只,致痫组32只,致痫+2-CAdo组32只,致痫+生理盐水组32只。干预:按1.5mg/kg腹腔注射马桑内酯(由哈尔滨医科大学药理学部提供)建立动物癫痫模型,全部大鼠于注射后5min出现抽搐,持续时间一两分钟。致痫+2-CAdo组于马桑内酯注射前1h及抽搐后1h经尾静脉注射2-CAdo(由ICN公司提供)剂量为0.6mg/kg,致痫+生理盐水组于马桑内酯注射前1h及抽搐后1h经尾静脉注射等量的生理盐水。主要观察指标:海马CA1区bcl-2。

摘要：目的:设计一套计算机控制的组织工程软骨实验用灌流型生物反应器。方法:通过计算机控制时间及流量,利用蠕动泵、密闭的硅胶管、玻璃管、储液瓶等串联设计一套无菌的灌流型软骨组织工程用生物反应器。结果:生物反应器由控制系统和培养系统组成,运行良好,能置于培养箱中对软骨细胞材料复合物进行动态培养。结论:反应器设计合理。整个生物反应器系统运行可靠。