摘要：旨在探究旋毛虫肌幼虫体内是否存在鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究根据GenBank中Ts-ODC全序列基因组设计三条特异性siRNA分子,采用脂质体浸染转染的方法将其分别转染至旋毛虫肌幼虫体内,使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光试验,筛选最佳干扰siRNA分子及最佳干扰条件;并在pH 1.5、2.5、4.5和6.6的条件下将肌幼虫分别培养0.5、1和2 h,从肌幼虫Ts-ODC基因转录水平、酶活性及存活率等方面分析Ts-ODC基因干扰对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响;将Ts-ODC基因被干扰的旋毛虫肌幼虫感染小鼠,在7和42 d时分别收集成虫和肌幼虫,分别计算其减虫率;将子一代肌幼虫在pH 2.5的酸性条件下培养2 h,计算其存活率,对Ts-ODC基因干扰的遗传性进行分析。结果显示,Ts-ODC siRNA-757为最佳干扰分子,转染12 h、浓度为2μmol·L^(-1)培养3 d时为最佳干扰条件;各组pH 2.5培养2 h时Ts-ODC基因转录水平最高,pH 1.5培养2 h时虫体的存活率明显低于其他培养条件(P<0.01),pH 4.5培养0.5 h时虫体体内酶活性最高;转染Ts-ODC siRNA-757的肌幼虫接种小鼠后,7 d时成虫和42 d时肌幼虫的减虫率分别为58.95%和65.91%;其子一代肌幼虫在pH 2.5的培养液内培养2 h时其存活率为49%。综上表明,旋毛虫肌幼虫体内具有鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究首次通过siRNA技术干扰旋毛虫肌幼虫Ts-ODC基因,且证实干扰Ts-ODC基因可降低肌幼虫抗酸能力,为后期旋毛虫病的防治提供新思路。

摘要：马铃薯奥古巴花叶病毒(potato aucuba mosaic virus,PAMV)是一种可对马铃薯造成危害的植物病毒,是英国和荷兰输华马铃薯种薯的检疫性有害生物。本文对依据PAMV病毒外壳蛋白基因序列设计的3对引物和已报道的7对引物进行了评价,并根据其中最好的一对引物构建了标准的PAMV RT-PCR检测方法。本方法仅能从马铃薯奥古巴花叶病毒扩增出目标片段,而对苜蓿花叶病毒、豇豆轻斑驳病毒、马铃薯帚顶病毒、马铃薯H病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、大豆花叶病毒等7种病毒无扩增反应,检测灵敏度为0.1 pg的病毒核酸。本方法为马铃薯检疫和种薯认证过程中马铃薯奥古巴花叶病毒检测提供了技术参考。

摘要：本文基于CRISPR-Cas系统,构建了食源性致病菌基因检测模型。利用基因编码测度技术对Cas蛋白基因中的向导RNA序列进行识别,提取其中的主要基因特征并进行分类。在此基础上,分别使用基因表达与分子诊断技术,根据序列特征,对基因表达数据的差异性与菌属分布概率进行分析。结果表明:通过设计特异性识别的向导RNA和基因差异表达的分析,实现对目标基因和致病菌的检测。这种方法为食源性致病菌的基因检测提供了一种精确、可靠且高效的工具。