摘要：本研究旨在克隆和表达水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)特异性抗原N蛋白,进而纯化并分析其免疫原性。根据GenBank中已发表的VSV基因组N基因序列,分别合成VSV两种不同血清型的N基因,经序列对比分析后,设计合成1对特异性引物,PCR扩增获得约1 300bp的N基因片段,将目的片段亚克隆至pColdⅠ原核表达载体中,经IPTG诱导表达后,采用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化重组N蛋白。SDS-PAGE分析表明,N基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为50ku;Western blotting检测结果表明,该重组蛋白与VSV多克隆抗体发生特异性反应。本试验成功构建了VSV-IND和VSV-NJ的原核表达载体,实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。

摘要：猕猴桃溃疡病是猕猴桃生产上的主要病害,为建立该病的快速诊断技术,本实验通过RAPD分析获得一条1 300 bp左右的致病菌的特异片段,对该片段进行克隆测序,在测序的基础上设计并合成一对特异引物F7/R7,优化特异引物扩增条件,并验证引物的特异性和灵敏性。利用该特异引物对包括猕猴桃溃疡病菌在内的14个菌株基因组DNA进行PCR扩增表明,只有猕猴桃溃疡病菌能扩增出1条约为950 bp的特异条带,其他菌株及对照均未扩增出特异条带。对采自果园的染病枝干组织和接种致病菌的枝干组织的检测表明,该特异引物能特异性地检测到猕猴桃溃疡病菌的存在,其在组织中的检测灵敏度为100 fg/μL。因此,利用设计合成的特异引物F7/R7,参考优化的体系和程序,结合简单的试剂盒法提取猕猴桃溃疡病菌或植物组织DNA,可以在短时间内完成对该病原菌的分子检测。

摘要：为建立一种快速、敏感检测水貂阿留申病毒(AMDV)的方法,本研究根据AMDV的VP2基因保守区设计特异性引物和MGB探针,并优化检测反应条件,建立了AMDV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL^1.0×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数(R^2)为0.998。该方法仅对AMDV的靶基因扩增呈阳性,而对猪细小病毒、犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好。该方法对AMDV检测的灵敏度为10拷贝/μL,为普通PCR灵敏度的100倍;组内和组间重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。应用建立方法和普通PCR方法分别对40份疑似临床组织病料样品进行检测,该方法检出率比普通PCR高约7.5%。本研究结果表明建立的AMDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于对AMDV的快速定量检测。

摘要：随着经济全球化和贸易自由化步伐加快,对出入境检验检疫工作在促进地方经济发展、把关国门安全及提高产品质量等方面提出了新要求,特别是航空物流的高度发达,使空港口岸检验检疫传统监管模式与方法受到冲击与挑战。为解决这些矛盾和问题,采用信息化手段设计和研发机场检验检疫综合业务管理系统,提升空港口岸监管有效性和科学性以及通关便利化水平。本文从分析当前四川空港检验检疫工作现状着手,针对空港检验检疫的电子全申报与全监管、自动风险预警、多种申报途径、全数据挖掘等重点难点问题进行了详细阐述。

摘要：目的分析国境口岸13蚊种的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因序列,为建立蚊种分子鉴定方法奠定基础。方法设计1对扩增COⅠ部分编码区的PCR引物,对广东、海南和云南等国境口岸采集的致倦库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊等成蚊进行PCR扩增和序列测定,分析COⅠ核苷酸的系统进化关系。结果 13种蚊种的COⅠ基因扩增片段长度均约为400 bp,A＋T含量为69.64%~72.78%。同源性比较表明,同一蚊种间核苷酸序列同源性〉95.6%;不同蚊种间COⅠ片段核苷酸序列同源性为79.1%~93.4%。COⅠ核苷酸系统进化关系显示,从种的水平上看,白纹伊蚊、致倦库蚊、中华按蚊等上述所有蚊种均聚集成簇,即同种之间呈明显的聚集,均与形态学鉴定结果相一致。结论建立的COⅠ核苷酸鉴别技术可应用于国境口岸范围内成蚊种的区分,基本上可正确反映蚊虫的系统发育关系。这可以弥补蚊虫形态特征信息量的不足等传统分类系统的缺点,为国境口岸范围内外来的或新发现的蚊种的鉴别提供分子水平的技术依据。

摘要：为了获得小反刍兽疫病毒特异性抗原N蛋白,用于血清中抗小反刍兽疫病毒抗体检测方法的建立,根据Gen Bank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白核苷酸序列,设计引物,扩增N基因。扩增片段通过NdeⅠ和HindⅢ酶切位点插入表达载体p ColdⅠ。重组蛋白通过p ColdⅠ载体转化,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了原核表达,经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,表达产物为58 k D的融合蛋白,可被PPRV感染动物血清识别,重组蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了检测PPRV血清的间接ELISA方法,与国外标准ELISA试剂盒的符合率达98.3%,为建立快速检测小反刍兽疫病毒抗体的检测方法奠定了基础。