摘要：目的:构建基于CRISPR Cas12a的高敏等温核酸检测方法,并评估其在支气管肺泡灌洗液及脑脊液中对于新型隐球菌的诊断能力。方法:利用NCBI Blast确定新型隐球菌保守序列,针对保守序列,设计等温重组酶聚合酶扩增引物及crRNA序列。利用新型隐球菌标准菌株及其他菌株(白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、金黄色葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌),提取其核酸,以评估方法的特异性及最低检测限。进一步收集临床确诊的10例肺部及10例中枢神经系统新型隐球菌感染患者的支气管肺泡灌洗液及脑脊液,以评估本研究构建的核酸诊断方法的临床检测性能。结果:共设计6组引物及crRNA组合,经筛选得到1组最佳组合。本研究构建的检测方法特异性高(与7种其他类型菌株无交叉反应),最低检测限达到5 copies/μL,整个检测流程速度快(在1 h内完成)。针对10例支气管肺泡灌洗液及10例脑脊液临床标本的阳性检出率均为100%。结论:本研究构建的新型核酸检测方法,具有高度的特异性和良好的检测限,在临床标本检测中同样具有优良检测性能,具备了较强的临床新型隐球菌核酸检测的应用潜力。

摘要：目的　建立中国人原发无精与少精症Y染色体无精症因子 (AZF)区域微缺失临床基因诊断的方法并进行初步评价。方法　在完成中国人原发无精与少精症Y染色体无精症因子区域微缺失分子流行病学研究的基础上 ,采用盲法和多重聚合酶链反应 琼脂糖电泳检测技术 ,利用挑选的AZFa、AZFb、AZFc 3个区域共 8个序列标签位点 (STS) ,对 10 0例原发无精与 80例少精症患者的精液进行微缺失分析。两组患者中各有 2 7例和 16例在事先分子流行病的研究中已确认存在AZF微缺失。结果　在原发无精症患者中检出STS位点缺失 2 7例 ,原发少精患者中检出AZF区STS位点缺失 16例 ,所有试验前被确认的AZF微缺失均被检出 ,未发现假阳性与假阴性结果 ,检测的灵敏度与特异性均为 10 0 %。结论　本研究所确定的AZF区域 8个STS位点缺失与中国人原发无精和严重少精密切相关 ,利用上述STS位点与试验设计的多重聚合酶链反应技术进行微缺失分析 ,可以准确、方便、快速地完成中国人原发无精与少精症AZF区域微缺失的基因诊断 。

摘要：氨是一种重要的工业原料,在化肥、染料、药品和炸药的制造中起着重要作用.由于氨的氢容量大、能量密度高且易于运输,被认为是一种潜在的无碳燃料.Haber-Bosch工艺实现了高附加值氨的大规模工业化生产,但其生产条件(400‒550ºC,15‒30 MPa)苛刻,且伴随着高能耗和CO_(2)排放.因此,开发绿色和可持续的氨合成方法,同时实现全球环境的可持续性势在必行.电催化氮还原合成氨(NRR)是近年来的研究热点,该技术可以在环境条件下进行,且可利用电子作为绿色还原剂,水作为质子源.此外,该过程具有实现分散和现场按需生产氨的巨大潜力,支持分布式肥料生产,从而降低运输成本.除了N2作为氮源,对环境有害且活性高于N2的氮物种(如NO,NO_(2)^(−)/NO_(3)^(−))已被认为是实现环境条件下生产氨的有吸引力的氮源,电催化NO还原(NORR)和NO_(2)−/NO_(3)^(−)(NO_(x)^(−))还原(NtrRR)合成氨具有应用潜力.本文综述了近年来电催化合成氨的研究进展.首先简要介绍了三种电催化合成氨路线(NRR,NORR和NtrRR)的研究背景和意义.然后,对环境条件下合成氨电催化剂的最新研究进展进行了详细讨论,主要涉及催化机理、理论计算和电化学性能.最后,对人工电催化合成氨当前面临的挑战和未来的研究需求作了总结和展望,包括:(1)注重理论计算,通过理论计算可以预测可能的活性位点、吸附能和反应途径,有助于快速筛选合适的催化剂,大大降低实验成本;(2)发展先进的原位表征技术来观察电催化剂表面上的动态变化和捕获/识别反应中间体,促进对真实反应机理的探索,从而进一步指导催化剂的设计;(3)确保数据的准确性和可重复性;(4)合理设计有效的电催化剂.为了进一步提高现有材料体系对氨合成的催化性能,需要开发更高效的材料设计策略(如精确调节单原子金属的配位环境、掺杂原子/空位的类型和浓度、合理暴露特定的晶体面等),以促进电催化剂的内在活性.此外,通过优化电催化剂的形态,构建特殊的结构(如尖刺),可以暴露丰富的活性位点,显著提高其表观活性;(5)研究特定的电极材料时,除材料工程外,扩展实验条件也至关重要,包括电解质的pH值、应用电位和氮物种初始浓度等,可能会影响催化活性和选择性;(6)文献报道的稳定性测试通常在50 h以下,对于工业运行(预计在高电流密度下可以稳定运行数千小时)来说,时间太短.因此,未来的催化剂设计需要以更长的测试时间为目标;(7)未来研究应进一步探索真实环境下NORR/NtrRR的催化活性,以实现更高效的氨合成;(8)应开发一种可替代的氨分离技术.在传统的Haber-Bosch工艺中,通过冷凝,氨从未反应的N2和H_(2)中分离出来,耗能大,因此应采用比冷凝工艺能量输入更少的分离技术;(9)从实际应用角度出发,还应考虑综合的技术经济评估,包括材料成本、总能源成本、设备维护成本和产品分离成本等,以评估氨电合成的大规模可扩展性和商业可行性.综上,开展电催化合成氨领域的研究有望以绿色和可持续的方式缓解环境污染和未来的能源问题.

摘要：目的建立直接检测粪便样本中溶组织内阿米巴的PCR方法。方法根据溶组织内阿米巴标准株基因组中小亚基核糖体RNA (small subunit ribosome RNA, SSU rRNA)序列合成4对特异性引物(2对自主设计引物和2对参考引物),建立PCR检测方法,用该方法对221例临床腹泻患者粪便标本进行检测,同时采用病原学碘染涂片镜检法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗原,对3种方法的阳性率进行比较,并采用Kappa检验进行一致性分析,分析3种检测方法结果的准确性。结果 4对引物均扩增出溶组织内阿米巴特异的目的片段,建立了粪便样本溶组织内阿米巴检测的PCR法。选择其中2对引物(1对自主设计引物和1对参考引物)对221例粪便样本进行PCR扩增,同时用碘染涂片镜检法查病原体,用ELISA法进行抗原检测,3种方法溶组织内阿米巴阳性检出率分别为2.26%、0.90%和9.50%,差异有统计学意义(χ~2=23.34,P<0.01)。PCR法与碘染涂片镜检法比较,Kappa值为0.216,一致性微弱; PCR法与ELISA法比较一致性差,Kappa值为-0.134。PCR法的结果与临床诊断的一致性最好。结论本研究通过自行设计引物建立的粪便样本溶组织内阿米巴PCR检测法在准确性上优于镜检法和ELISA抗原检测法,为该方法用于临床诊断提供了实验基础。

摘要：目的 客观评价PCR技术在人类免疫缺陷病毒(human immune-deficiency virus,HIV)检测中的性能,了解聚合酶链技术(polymerase chain reaction,PCR)PCR技术作为艾滋病筛查方法的临床应用价值。方法 以diagnosis Tests(诊断性试验),AIDS(艾滋病),PCR(聚合酶链反应),HIV(人类免疫缺陷病毒)为检索词,对1991年～2001年的MEDLINE和CBM进行了回顾性机检,并根据国际公认标准对纳入文献进行分析。结果 共检索到567篇论著性文章,纳入53篇。其中与金标准进行对比的有47％,同时计算了和能计算出敏感度、特异度、预测值等统计学指标的文章数量分别为25％、23％和23％。没有文章计算似然比。结论 PCR技术在HIV检测特别是筛查中的应用还处在探索阶段,有待于提高研究方案的总体设计水平。

摘要：目的 了解不同医院空气净化方式应用情况。方法 在中国7个地区7个省选取不同级别、不同类型的医院进行调查,调查《医院空气净化管理规范》颁布后各医院空气净化方式应用现况,包括不同空气净化方式的应用、空气净化方式组合使用情况,以及不同区域空气净化方式应用情况。结果 共收到340所医院的调研结果,38.53%(131所)的医院有负压隔离病房,81.47%(277所)的医院有洁净手术间,97.35%(331所)的医院有空气消毒器。70.00%(238所)的医院在某一空间同时使用两种及以上空气净化方式,综合重症监护病房、感染疾病科、发热门诊多采取三种及以上空气净化方式,所占比率分别为55.93%、43.01%和38.49%;最常见的组合方式为自然/机械通风+空气消毒器(83.19%,198/238),20.59%(49/238)的医院在洁净技术房间辅以紫外线灯进行消毒。各区域除非洁净手术室、产房、导管室、消毒供应中心外,80%以上均有通风系统。结论 空气净化方式的选择多元化,建筑设计更加注重通风,但空气净化方式的选择仍存在过度及不规范的现象。

摘要：系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病过程是由多因素调控的渐进过程,分为亚临床期、急性炎症期、慢性自身免疫病期和转归期4个阶段[1](图1)。B细胞作为SLE发病机制中的重要环节,其表面表达很多免疫激活和免疫抑制作用的分子。激活分子包括B细胞受体(B cell receptor, BCR)[2]、Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs)[3]和B细胞表面抗原CD40 [4]等。抑制分子包括Fc受体FcγRIIB (Fcγ receptor IIB, FcγRIIB)[5]和CD72 [6]、程序性死亡蛋白1(programmed death 1 protein,PD-1)[7]等,这些分子所提供的信号作用于B细胞,影响B细胞活化的性质和程度,控制由此产生的B细胞亚群分化及抗体产生[8](图2)。B细胞表面分子双向调控失衡可导致B细胞免疫功能出现异常,进而导致SLE发生。鉴于B细胞靶向治疗越来越多地应用于临床,充分理解B细胞表面分子在SLE炎症调节的不同作用,并设计出安全有效的免疫治疗方案可能是今后研究的重点。本研究综述了B细胞正向负向两类调控分子及相关靶向治疗在SLE中的研究进展,充分认识不同分子对B细胞功能的调控在SLE发病机制中的作用及靶向治疗中的应用,为SLE治疗药物设计提供新的策略。

摘要：目的建立一种快速检测唐氏综合征（Down syndrome，DS）的双色竞争性荧光定量聚合酶链反应（dual-color competitive quantitative fluorescent polymerase chain reaction，DCC-QF-PCR）方法，并探讨其应用于DS产前诊断的可能性。方法提取30例DS患者和60名正常人的外周血DNA，设计DSCR和USC2两基因的特异共用引物和双色特异性TaqMan探针，同一反应管中进行两基因的DCC-QF-PCR，并与DSCR和GAPDH两基因的QF-PCR实验结果进行比较。提取46份羊水胎儿细胞的DNA进行DSCR和USC2两基因的DCC-QF-PCR，并与染色体核型分析结果对比；克隆出DSCR和USC2的单克隆基因片段，定量后进行定量配比的DCC-QF-PCR，并计算DSCR：USC2拷贝数的比值。结果DCC-QF-PCR检测中，DS患者DSCR：U5（、2拷贝数比值范围为1．41-1．74，显著高于正常人的0．93-1．15；而QF-PCR检测中，DSCR：GAPDH拷贝数比值范围较DSCR：USC2增大。46份羊水检测中，3份DSCR：USC2拷贝数比值分别为1．61、1．64和1．54，为DS患儿，其余43份正常，与染色体核型分析结果一致；DSCR与USC2基因定量配比的DCC-QF-PCR所得DSCR：USC2拷贝数比值范围与配比值差异无统计学意义（P〉0．05），检测结果较为稳定。结论DCC-QF-PCR具有准确、快速、需模板量少和费用低廉等特点，该方法在DS的基因诊断和产前基因诊断中有较为广泛的应用前景。

摘要：目的检测新型冠状病毒肺炎(novel coronavirus pneumonia,NCP)病例的多种生物样本的带毒状况,初步观察2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)在机体不同系统的状态及其临床意义。方法采用小样本横断面观察性研究设计,纳入宜宾市第二人民医院·四川大学华西医院宜宾医院2020年2月2日在院隔离治疗的NCP确诊病例,应用实时荧光逆转录聚合酶链反应检测技术,设计针对2019-nCoV-1ab区和N区的2套引物,检测单日采集的咽拭子、血液、粪便、尿液标本的2019-nCoV核酸。结果共纳入7例输入型普通型NCP病例。7例患者在发热后第3~7天经咽拭子/痰液/纤维支气管镜灌洗液标本2019-nCoV核酸检测阳性确诊,其中2例在发热后第3天确诊。经治复查时间分别处于各患者发热后的第7~15天,2019-nCoV核酸检测结果显示,5例患者咽拭子检测阴性,其中1例处于发热后第7天;7例患者血液、粪便、尿液中均未检测出2019-nCoV核酸。结论对于普通型NCP病例,实时荧光逆转录聚合酶链反应检测在技术上可在发病后第3~7天检出2019-nCoV核酸,同时2019-nCoV核酸可在病程第7天开始转阴。普通型NCP病例在病程第7~15天期间的单日血液、粪便、尿液中未检出2019-nCoV核酸。该研究仅为初步的探索性研究,尚需要更高质量的研究来获得更为确定性的结论。

摘要：应用全自动生化分析仪进行免疫比浊测定 ,将生化检测的快速性和免疫分析的特异性结合 ,具有快速、特异、自动化、成本相对低廉的优势。现就免疫比浊法应用于生化仪上产生的对抗原过量钩状效应的防范措施及设计信号强度的能力与散射比浊法进行比较 ,以提示在单克隆蛋白检测中应注意有效防范 ,避免漏诊 。