摘要：目的构建短发夹RNA（shRNA）／mdr1的质粒表达载体并验证其体外表达效率。方法按照pSUPER的设计要求合成mdr1基因RNAi靶序列的64bp寡核苷酸序列，退火后双酶切法（BglⅡ和HindⅢ）克隆，得到质粒pSUPER-shRNA／mdr1，转染感受态大肠杆菌，筛选阳性克隆，测序证实后扩增培养并提取，然后转染融合达90％以上的HepG2／mdr1细胞，阴性载体为对照组，实时聚合酶链反应（Real-timePCR）、流式细胞术检测mdr1基因mRNA、P-gp表达、细胞耐药性等功能变化。结果成功构建质粒载体pSUPER-shRNA／mdr1，基因测序证实靶序列插入正确；HepG2／mdr1-si组mdr1基因的mRNA表达水平是耐药株HepG2／mdr1组的56分之一；HepG2／mdr1-si组细胞和阴性对照组HepG2／mdr1细胞的P-gP表达率分别为11.0％和98．6％，P〈0．05；HepG2／mdr1组细胞耐药倍数从62．5下降到1．4，相对逆转效率99．34％；细胞内DNR累积量也明显增加，与对照组比较（79．32％比37．96％），P〈0．05。结论多药耐药基因mdr1质粒表达载体pSU-PER-shRNA／mdr1能在HepG2／mdr1内稳定表达，并逆转其耐药性。

摘要：报道罕见的女性A型血友病1例,并对其凝血因子进行基因突变分析。患者,女,65岁,因为跌倒后右胸痛2d入院,院内查体提示胸壁皮下血肿,双下肢等长,髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61.3s,正常血浆纠正后为41.3s,而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。F活性为2%,F活性为200%,vWF:Ag为120%,vWF:RCof100%,vWF:CBA128%,F结合分析正常;髋关节X片提示:双侧髋臼发育不良,髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA,根据NM000132之凝血因子F基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物,行聚合酶链反应扩增,并对扩增产物进行测序分析,测序结果与标准序列进行比较,发现该患者出现4111A→C杂合突变,使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸,产生一错意突变,该突变未见其它文献报道。

摘要：目的研究siRNA对肝癌耐药细胞系HepG2／mrp1中多药耐药相关蛋白基因（multi—drug-resistant-associated1，mrp1）及其蛋白产物MRP1表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果。方法设计合成针对mrp1启动子区域的RNA干扰小片段，转染肝癌耐药细胞HepG2／mrp1。通过RT-PCR和流式细胞仪，在mRNA和蛋白质水平评估RNA干扰对mrp1表达的影响；MTT法检测RNA干扰逆转HepG2／mrp1细胞多药耐药性的变化，按照实验组和亲本组细胞的半数抑制剂量（IC30）评估RNA干扰对细胞耐药倍数的改变。结果在耐药细胞HepG2／mrp1中，RNA干扰明显抑制了mrp1mRNA和蛋白产物MRP1的表达水平，在相同浓度药物作用下实验组细胞耐药性显著下降。结论我们设计的siRNA对肝癌耐药细胞HepG2／mrp1中的mrp1基因有显著的抑制作用，具有良好的逆转多药耐药性的效果。