摘要：目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以相应慢病毒转导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。经流式细胞分选术(FCAS)筛选出绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞,采用real-time PCR及Western blot方法检测GRP78基因的mRNA和蛋白表达。结果测序证实,成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3。慢病毒转导AR42J细胞后,经荧光显微镜和FCAS证实转导效率>85%。经real-time PCR验证,与未处理组相比,LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3处理组对GRP78mRNA表达的沉默效率分别为69.4%±1.42%、74.7%±1.69%和86.6%±1.73%(P0.05)。Western blot结果显示各组GRP78蛋白表达与mRNA表达趋势一致。结论成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体,建立了稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株AR42J,为探讨GRP78基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供了新的细胞模型。

摘要：目的 比较多模式镇痛和传统模式镇痛对胃癌患者术后镇痛效果、术后恢复指标及并发症的影响。方法 采用前瞻性非随机对照临床研究方法设计，纳入自2016年10—12月期间，四川大学华西医院胃肠外科中心两个胃癌专业治疗组（A组和B组）所收治的胃癌患者，其中治疗A组所收治患者采用术后多模式镇痛方式（多模式镇痛组，32例），具体为：（1）关腹前于切口周围浸润注射1∶1稀释的罗哌卡因（100 mg，10 ml），逐层缝合切口；（2）术后开始每12 h静脉滴注帕瑞昔布钠（40 mg），使用5 d；（3）术后第1天或第2天开始口服氨酚羟考酮片，2次/d，每次50 mg；（4）术后不使用镇痛泵。治疗B组所收治患者采用传统模式镇痛（传统模式镇痛组，33例），为直接缝合伤口，不做切口浸润。术后使用镇痛泵。观察并比较两组患者术后的疼痛评分、恢复情况和术后30 d并发症发生率。结果 多模式镇痛组术后1、2、3、4和5 d疼痛评分分别为（4.8 ± 0.9）分、（4.3 ±1.0）分、（2.9 ± 0.8）分、（2.4 ± 0.7）分和（1.7 ± 0.7）分，明显低于传统模式镇痛组的（5.9 ± 0.9）分（P= 0.000）、（5.1 ± 0.7）分（P= 0.001）、（3.9 ± 0.8）分（P= 0.000）、（3.0 ± 0.6）分（P= 0.000）和（2.6 ± 0.7）分（P= 0.000），差异均有统计学意义。多模式镇痛组术后住院时间[（8.2 ± 1.6）d比（10.6 ± 2.2）d，P= 0.000]、术后首次离床时间[（47.5 ± 13.8）d比（66.2 ± 16.8）d，P= 0.000]、首次排气时间[（76.4 ± 25.2）d比（120.0 ± 29.9）d，P= 0.000]、首次排粪时间[（117.3 ± 42.2）d比（159.7 ± 30.7）d，P= 0.000]、首次流质时间[（83.8±21.6）d比（141.9±33.9）d，P= 0.000]均早于传统模式镇痛组。两组患者术后30 d总体并发症发生率分别为9.4%（3/32）比9.1%（3/33），差异无统计学意义（P= 1.000）。结论 对于胃癌手术患者，多模式镇痛显著降低了患者术后疼痛的主观感受，有利于术后短期恢复，未增加术后并发症风险，是安全有效的。

摘要：中国西部胃癌协作组自2011年于重庆成立以来，成员单位已由初期的20余家单位发展为至今的36家协作组成员单位，协作组覆盖中国西部各个省、自治区及直辖市。在协作组成员单位成立至今的6年时间里，除定期召开协作组年会，还定期开展胃癌规范化治疗巡讲、胃癌微创外科治疗及外科临床研究方法学等培训班，并邀请国内外知名学者参与交流。协作组自2011年即建立中国西部胃癌协作组多中心胃癌数据库。在数据库建立时，借鉴了四川大学华西医院和第三军医大学西南医院两家单位数据库建设的经验，同时数据库的设计、录入及管理工作也参考了日本胃癌协会日本全国胃癌登记录入系统。在数据录入收集过程中，190项数据类目均有统一的定义及录入标准，定义标准主要参照日本胃癌指南。目前该数据库已登记11 872例胃癌病例数据，拟于近期对数据库2011—2015年内收集的胃癌临床病例资料进行回顾性研究。此外，西部胃癌协作组也同时开展前瞻性多中心临床研究，协作组首个多中心前瞻性随机对照研究（WCGCC-1202）已于2015年初开始入组，目前研究进展顺利。在下一阶段的工作中，协作组将进一步完善目前已经建立的数据库，优化数据库管理流程，开展更多的临床研究。同时加强与中国循证中心等临床研究方法学团队的合作与交流，扎实临床研究方法学根基，从根本上保证研究的质量。在胃癌规范化治疗方面，进一步加强与其他国际胃癌中心的交流，并加强与胃癌多学科治疗团队的合作，期待能够从整体上提高我国西部胃癌综合治疗水平及临床研究水平。

摘要：目的建立稳定沉默髓样分化因子88基因(MyD88)的大鼠胰腺导管细胞株ARIP。方法设计并构建编码MyD88 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并用三质粒包装系统包装成慢病毒,分别命名为Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2。将ARIP分为未处理组、Lenti-Non Target阴性对照组、Lenti-shMyD88-1组和Lenti-shMyD88-2组。并用相应的病毒转导(未处理组只换液)。经流式分选和抗生素筛选结合的方法筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,测定细胞的转导效率并用real-ti me PCR方法测定沉默效率。结果成功构建了编码表达MyD88的shRNA表达质粒。经流式分选和抗生素筛选后,慢病毒转导效率均达到100%。与未处理组相比,Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2对MyD88 mRNA的沉默效率分别为82.73%±1.203%和75.56%±1.176%。结论建立了MyD88基因稳定沉默的胰腺导管细胞株。为探讨MyD88基因与急性胰腺炎的相关性提供了一个全新的、稳定的、可操作的细胞模型。

摘要：目的比较远端胃癌D2根治术Billroth-Ⅰ式、Billroth-Ⅱ式和Roux-en-Y 1年期上消化道内镜评估结果。方法采用病例-对照研究设计，收集2011年1月至2014年4月期间四川大学华西医院胃肠外科中心接受外科手术治疗行D2远端胃癌根治术的部分胃癌患者的临床病理资料。根据消化道重建方式不同，将患者分为Billroth-Ⅰ组、Billroth-Ⅱ组和Roux-en-Y组，比较3组患者的术后恢复指标及术后1年期上消化道内镜评估结果。结果除Roux-en-Y组的手术时间（268.4±43.9）min较Billroth-Ⅰ组（228.2±46.4）min及Billroth-Ⅱ组（245.0±38.0）min明显延长外（P= 0.034），3组患者其他临床病理资料比较，差异无统计学意义（均P〉 0.005）。术后除进食流质饮食时间3组间差异无统计学意义（P= 0.086）外，Billroth-Ⅱ组胃管拔除时间、引流管拔除时间及肛门排气时间均较另外两组明显延长。Billroth-Ⅰ组，Billroth-Ⅱ组及Roux-en-Y组术后30 d天并发症发生率分别为25.0% （5/20）、40.0% （8/20）和25.0% （5/20），差异无统计学意义（P= 0.490），术后并发症发生的类型3组间差异也无统计学意义（P= 0.180）。术后1年期上消化道内镜评估结果：Billroth-Ⅱ组胆汁反流发生率为35.0% （7/20），Billroth-Ⅰ组为25.0% （5/20），Roux-en-Y组为5.0%（1/20），差异无统计学意义（P= 0.067）；无残胃炎发生（评分为0）患者的比例，Billroth-Ⅰ组为25.0%（5/20），Billroth-Ⅱ组15.0% （3/20），Roux-en-Y组50.0%（10/20），差异有统计学意义（P= 0.024）。结论Roux-en-Y式重建虽然较Billroth-Ⅰ式及Billroth-Ⅱ式重建显著延长手术时间，但其并没有增加围手术期并发症发生的风险；且在控制远期残胃炎及胆汁反流上存在一定优势，可考虑在临床实践中推广。

摘要：消化道重建是胃癌外科手术中的重要环节。消化道重建方式的选择与消化道重建新术式的应用是胃癌消化道重建领域研究中的重要议题。消化道重建方式的临床研究需通过科学的研究设计与实施,综合评估重建方式对外科安全性结局、远期生存结局、生活质量的近远期变化、内镜下黏膜变化以及术后患者营养状态等观察指标的影响。此外,卫生经济学指标分析也是消化道重建研究中需要考量的指标之一。依据患者个体化特征选择合适的消化道重建方式可能是今后消化道重建研究领域的重要方向。

摘要：为了构建microRNA-21、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)真核表达载体pEGFP-N1-pre-miR21、pEGFP-N1-PTEN及短发夹状RNA(shRNA)表达载体Psilencer4.1-CMV-mir21-shRNA、Psilenc-er4.1-CMV-PTEN-shRNA,我们根据microRNA-21、PTEN基因序列设计合成shRNA及PCR引物;将microRNA-21、PTEN shRNA片段退火后的DNA模板定向克隆到Psilencer4.1-CMV质粒;另采用RT-PCR技术从人结肠癌细胞HCT-116中扩增pre-miR-21及PTEN,并将PCR产物双酶切后定向克隆到pEGFP-N1质粒上,构建重组载体。经菌落筛选、双酶切及DNA测序分析检测重组载体构建是否成功。结果显示筛选出的阳性克隆经双酶切鉴定得到与载体及目的片段大小一致的两条片段。测序证实目的基因pre-miR-21、PTEN及其shRNA序列分别正确连接到pEGFP-N1及Psilencer4.1-CMV的多克隆位点。结论:成功构建microRNA-21、PTEN基因真核表达及shR-NA表达载体,为进一步研究microRNA-21及PTEN基因在结直肠癌中的作用奠定了基础。

摘要：目的 模拟急性胆源性胰腺炎的发病条件,制作一种符合临床特点的大鼠急性坏死性胰腺炎模型.方法 设计大鼠胰胆管单扎和双扎两种结扎方法,测压并用2%甘氨脱氧胆酸（GDCA）以35 cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa）压力恒压灌注5 min,8、16、24 h剖杀,观察急性胰腺炎的发生情况.结果 单扎组胆胰管压力为：（20.60±1.51）cm H2O,双扎组为：（29.37±0.87）cmH20.两组均诱导急性胰腺炎,于24 h表现出坏死性胰腺炎特征.病理学评分显示,随时间进程,胰腺炎逐渐加重（P＜0.01）.在各时间点,胆胰管双扎组炎症重于单扎组（P＜0.01）.结论 恒压灌注2%GDCA联合胰胆管单扎和双扎均可诱导出大鼠急性坏死性胰腺炎;胰管压力及其持续时间与急性胰腺炎发生、发展密切相关.

摘要：我国外科临床研究领域已有不少突破,但总体质量相对不高,主要体现在方法学的规范性、合理性和严谨性欠缺。因手术技术和设备应用的固有特点,在外科领域开展高质量临床研究须建立一套相适应的方法学体系。IDEAL协作网针对外科技术和设备创新提出了一套系统的方法学框架,即"IDEAL框架"。其主体分为5个序贯阶段:设计(idea)、开发(development)、探索(exploration)、评价(assessment)和长期随访(long-term follow up)。不同阶段所面临的困难、需解决的问题和采用的研究设计各有不同,须逐步推进。IDEAL框架虽然并非最完美,但仍是当前外科临床研究的最佳设计构架。在规范开展外科临床研究过程中,我们应积极思考如何改进和提高外科临床研究的方法学。

摘要：循证医学的兴起是从经验性医学向基于客观证据为导向的当代医学转变的重要节点。在生物医学数据大爆发的当今．新兴的大数据分析能够高效地解决生物医学和医疗卫生活动中的探索性或决策性问题。目前的问题是．我国还没有很好地开展和应用大数据分析来解决问题．如临床决策或公共卫生决策，而不应该争论大数据分析是否将取代循证医学。无论是循证医学或是大数据分析，在我国最关键的基础是原始数据库的设计、建设和收集．这才是我们应该清楚认识的现实问题。