摘要：目的探讨A549细胞株NS基因的表达干扰后,A549细胞株的mRNA表达水平及细胞增殖变化。方法构建NS shRNA真核表达载体,转染A549细胞,G418筛选稳定表达细胞克隆,RT-PCR检测NS基因沉默,MTT检测细胞增殖情况。结果构建的NS shRNA真核表达载体经菌落PCR和测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR检测显示构建的shRNA表达载体转染A549细胞后可显著降低NS mRNA的表达;MTT结果显示干扰后细胞增殖速率明显减低。结论成功构建了一组针对NS基因的shRNA真核表达载体,转染A549细胞后NS基因表达被特异性沉默,且细胞增殖受到明显抑制,通过RNAi技术实现NS基因沉默可能是一种较有前景的肿瘤治疗方法。

摘要：目的:构建DYS456,DYS392,DYS439,Y-GATA-H4等4个Y-mini STR基因座复合扩增体系,评价其检测敏感度、数据库兼容性和对降解检材的分型能力。方法:设计4个Y-mini STR的引物,用FAM、JOE、ROX、TAMRA分别标记其上游引物,构建复合扩增体系。利用本体系的引物扩增稀释过的Y23试剂盒的ladder,制备等位基因分型标准物。比较该体系与Promega Power PlexY23试剂盒在普通检材、降解检材的分型能力、敏感度和分型结果。结果:同一样本体系分型结果和商业化试剂盒Y23 STR分型结果相同,4个Y-mini STR复合扩增体系和对降解检材的分型成功率更高,敏感度一致,具有数据库兼容性。结论:本研究中的4个Y-mini STR复合扩增体系对降解检材的检测具有应用价值,敏感性较好,具有数据库兼容性,可以作为对降解检材分型时商业化试剂盒的补充。

摘要：目的研究黄芩提取液体外抑菌的最佳提取工艺及黄芩苷的细胞保护作用。方法采用正交实验设计,以黄芩提取液的最低抑菌浓度(MIC)及黄芩苷的含量为指标,筛选最佳提取工艺。以MTT法测定黄芩苷对TNFα/INFγ联合刺激人皮肤角质细胞(HACAT)的保护作用。结果综合极差数据、抑菌实验结果,确定工艺路线为A_3B_3C_2,即:10倍量60%乙醇,提取2次,每次1.5 h。黄芩提取液对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有良好抑制作用,黄芩苷对TNFα/INFγ刺激HACAT细胞引起的炎症反应具有明显的抑制作用。结论提取方法稳定合理,提取液具有良好的抗菌作用,黄芩苷也有较好的抗炎作用。

摘要：针对cyt b基因和ND6基因序列,设计两对引物,以14种常见动物(包括人)生物性检材为对象进行PCR扩增,产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、硝酸银染色进行分析。结果证明,两条电泳条带者为人样本,分别是cyt b基因片段(358 bp)和ND6基因片段(181 bp);一条电泳条带者为动物来源,是358 bp cyt b基因片段。在37.5μL PCR反应体系中最小检出模板量为0.25 pg基因组DNA。检材在4℃、室温和37℃温度下,经过4个月后均可获得正确的种属区分。高度潮湿环境中放置50 d的检材、形成于水泥地面、墙面、泥土等基质上的血痕,本方法可得到正确区分。由此建立的种属鉴定的线粒体基因复合扩增体系,其检测片段短、灵敏度高、操作简易,适合法医学上微量、降解、陈旧检材的种属判定。

摘要：目的优化MRSG mRNA表达的Taqman荧光定量PCR检测反应体系并进行系统评价。方法设计荧光PCR适用的引物和探针,从模板、引物、探针、镁离子浓度等方面优化荧光定量PCR检测反应体系,评价优化系统的特异性和稳定性。结果确定系统的模板取样量为2μl,引物浓度为0.4μmol/L,探针浓度为0.2μmol/L,Mg^(2+)浓度为4mM,建立了稳定的MRSG mRNA表达的Taqman荧光PCR检测方法。结论优化后的MRSG mRNA荧光PCR检测方法特异性和稳定性较好。

摘要：目的构建阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶(adenynate kinase,AK)基因真核表达载体并予以鉴定。方法根据AK基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从阴道毛滴虫基因组DNA中扩增出AK基因,并将其克隆入pMD18-T Simple载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用BLAST软件辅助分析所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列的同源性。克隆载体PMD-18T-AK经限制性内切酶BamHI和XbaI双酶切,得到含这2个酶切位点之AK DNA片段,T4连接酶连接到含有这2个酶切位点的真核表达载体pcDNA3.1(+),构建出重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-AK,经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实DNA片段大小的正确性。结果经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实含大小正确的AK DNA片段。结论成功地构建了基因真核表达载体。

摘要：骨龄判断在医学、司法鉴定、体育等领域得到广泛应用,人工评估费时且结果可能因医师水平不同出现差异。提出一种基于深度学习卷积神经网络和手骨数据关键区域融合、拓展的方法对手骨X线片骨龄自动评价,快速得到手骨X线片的准确骨龄。方法收集四川大学华西第二医院及RSNA2017骨龄比赛X线片数据,预处理后,设计深度学习骨龄评价神经网络进行训练,获取模型对骨龄的预测值与真实值误差在±1岁误差的准确率和平均绝对误差(MAE),结果显示四川大学华西第二医院数据误差±1岁的准确率:女性为94.25%,男性为94%;平均绝对误差:女性为0.5125岁,男性为0.5575岁。RSNA数据误差±1岁的准确率:女性为93%,男性为95%;平均绝对误差:女性为0.56岁,男性为0.55岁。通过广泛的对比,研究提出的方案不仅得到更高的骨龄评价准确率,同时研究提出的卷积神经网络结构简单,在网络训练和评价速度方面均具有明显优势。

摘要：目的:构建含有野生型或突变型人三叶因子1(Trefoil factor1,TFF1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型TFF1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24 h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-TFF1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-TFF1-ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-TFF1-AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-ERE+AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-TFF1质粒和pGL3-TFF1-ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型TFF1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的TFF1启动子转录活性增强发挥决定性作用。

摘要：目的动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是心血管疾病死亡的主要原因。目前,AS的药物递送治疗面临巨大挑战,如特异性靶标递送,药物控释等。本文根据AS部位的特异性微环境设计能靶向AS并控制释放药物的纳米载体。方法通过共价结合合成CTSK酶响应性聚合物PLGA-peptide-PEG和AS靶向聚合物PLGA-PEG-c(RGDfC)。

摘要：目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/CTB-Eg;用脂质体法转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察和PCR法检测其转染效率。结果成功构建了真核表达质粒pEGFP-C2/CTB-Eg,且该重组质粒能在HEK293T细胞中瞬时转染,转染效率在50%～70%之间。结论本研究成功设计、构建了CTB-Eg融合基因,其在HEK293T细胞中转染效率较高,为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础。