摘要：目的调研分析新冠肺炎疫情防控期间线上教学的开展、实践与改进。方法采用线上问卷的形式,面向四川大学华西基础医学及医学基础相关课程的学生开展关于线上教学运行、授课方式、授课改进与课程质量等的调研,定期分析、探讨与改进。结果在线教学形式主要有3种,即在线直播(含专业教育平台及非专业教育平台)、慕课、录播结合在线讨论。在线教学形式多样,98.4%的学生认为教师所选用的在线教学平台与课程相适配,建议部分课程所选用的平台可调整为其他平台。同一种授课形式在不同课程中学生的接受程度有明显差异。学生对在线教学的总体满意度评分6分及6分以上的达98.56%,教学效果的调研结果显示55.8%的学生认为线上教学效果可达线下教学的大部分,27.82%的学生认为线上教学效果与线下教学效果差不多,8%左右的学生认为线上教学效果比线下教学效果更好。结论新冠肺炎疫情防控期间线上教学基本达到了课程教学目的,为高等教育课程教学模式的改革提出了新的思路。现有关于线上教学效果讨论的报道多集中于学生的整体情况,缺少针对医学生不同年级、不同阶段及不同课程特点的线上教学适应情况,本研究在一定程度上补足了这一缺口。结果表明,不同年级的学生反馈稍有不同,不同线上教学方式在不同课程的应用效果差异显著。在疫情常态化防控下,完善在线教学的整体设计,提高平台运行稳定性、加强过程质量监督、完善效果评价机制,以切实保障高等教育教学质量。

摘要：目的　探讨卡介苗能否增强 Fall- 39在人肺腺上皮 SPC- A- 1细胞中的表达 ,分离鉴定卡介苗刺激作用的有效胞壁蛋白组份 ,并检测其抗菌活性。方法　根据 Gen Bank中人 Fall- 39的 c DNA序列资料 ,设计特异性引物 ,应用 RT- PCR法检测 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达 ,采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG- 75柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份 ;采用琼脂糖弥散杀菌法检测 SPC- A- 1细胞培养上清的抗菌活性。结果　卡介苗刺激 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达明显增强 ,而且这种诱导增强表达在一定范围内具有刺激物剂量和时间依赖性。卡介苗胞壁蛋白层析所得 6个组份中 ,组份 4 (相对分子质量范围约 2 1～ 2 9× 10 3)诱导 SPC-A- 1细胞 Fall- 39m RNA的表达增强约 8.5倍 ,其培养上清的抗菌活性显著增强。结论　 BCG胞壁蛋白是 Fall- 39基因的激活因子 。

摘要：目的　构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法　采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆入 PGEXλ1T质粒中 ,转化大肠杆菌 JM10 9,并用 IPTG诱导 ,表达的 FAL L -3 9- lys3 2经纯化后与 FAL L - 3 9进行抗菌活性比较。结果　 DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后的FAL L - 3 9- lys3 2蛋白对大肠杆菌 ML - 3 5 p的抗菌活性明显增强 ,其最低抑菌浓度 ( MIC)和最低杀菌浓度 ( MBC)分别由 FAL L - 3 9蛋白的 18.75和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 10 .94和 2 1.88μg/ m l,对绿脓杆菌ATCC2 785 3的 MIC和 MBC值分别为 FAL L - 3 9蛋白的 3 1.2 5和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 18.75和 3 1.2 5μg/ ml。两种蛋白均在含 Medium E的 L B培养基中表现出较高活性 ,在 L B培养基中抗菌活性最低 ,但在同一种培养基中 FAL L - 3 9- L ys- 3 2蛋白抗菌活性要高于 FAL L - 3 9蛋白。结论　用两步 PCR定点突变技术获得一个 FAL L - 3 9- L ys3 2突变子 ,其表达分子的抗菌活性明显增强 ,提示在 FAL L - 3 9分子中增加碱性?

摘要：本文制备、优化转铁蛋白修饰的前阳离子脂质体,并研究其相关性质。通过薄膜分散膜挤压法制备空白前阳离子脂质体;以鱼精蛋白缩合质粒DNA与空白前阳离子脂质体作用形成载基因前阳离子脂质体(PLPD);转铁蛋白(transferrin,Tf)再与PLPD作用形成转铁蛋白修饰的载基因前阳离子脂质体(Tf-PLPD);中心组合设计优化制备工艺;以lacZ为报告基因转染人肝癌细胞株HepG2;测定形态、粒径、电位和转染效率。结果显示,PLPD形态近似于球体,平均粒径为(228.9±8.0)nm,多分散指数为0.122±0.020(n=3);zeta电位为(-25.08±2.50)mV(n=3),转染效率(12.18±3.80)***-1(protein)。Tf-PLPD平均粒径为(240±12)nm,多分散指数为0.150±0.030(n=3);zeta电位为(-24.10±2.50)mV(n=3);转染效率(24.26±2.60)***-1(protein)是裸质粒的20倍;实验结果也表明血清的存在不影响PLPD和Tf-PLPD的转染效率;PLPD和Tf-PLPD小于阳离子脂质体LPD对人肝癌细胞HepG2,SMMC7721和张氏正常肝细胞3种细胞株的毒性。由此可见,转铁蛋白修饰的前阳离子脂质体作为基因转运的非病毒载体具有良好的应用前景。

摘要：目的初步构建DNA甲基化联合SNP分型体系,探索其用于精液来源鉴定的价值。方法首先通过分析甲基化芯片数据筛选出精液特异性的甲基化位点,通过软件设计出各位点特异性引物,再利用SNaPshot技术对各位点相邻的SNP进行检测,尝试鉴定精液来源。结果本实验成功构建了以精液作为鉴定对象的四位点甲基化-SNP分型复合检测体系,其对62份随机取样的中国汉族体液样本的鉴定结果表明其特异性良好,可准确区分出44份精液或精斑样本与其他三类共18份体液样本。且其灵敏度佳,在转化DNA量为0.5ng时仍可获得完整分型。在混合斑实验中,当精液与阴道分泌液体积比例为1∶40时,该复合体系仍能获得精液完整的分型图谱。结论该四位点复合分型体系在精液鉴定中具有重要价值,证明了DNA甲基化联合SNP分型体系用于体液鉴定的可行性。

摘要：为进行HMGN2的亚细胞定位分析,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HMGN2 cDNA,以pcDNA3.1-myc-his和pEGFP-N1为载体,成功构建出HMGN2真核表达载体,转染HeLa细胞,转染效率达70%～80%,用抗六组氨酸臂的单克隆抗体经免疫细胞化学染色显示经pcDNA3.1-myc-his-HMGN2转染的HeLa细胞除细胞核外,胞浆亦明显着色,未转染的Hela细胞无论细胞核还是细胞浆均显阴性;用兔抗人HMGN2多克隆抗体进行的免疫细胞化学染色显示转染的HeLa细胞与用抗六组氨酸臂的单克隆抗体检测结果相同,而未转染的Hela细胞核内和胞浆也均有着色.用两种抗体行ELISA分析在细胞培养上清亦检测到HMGN2.激光共聚焦显微镜下观察pEGFP-N1-HMGN2转染的HeLa细胞发现绿色荧光主要在核内,但核外也同样存在.本实验结果证明HMGN2不仅存在于细胞核中,而且分布于细胞浆,亦可分泌到细胞外.

摘要：目的　为结核病新型疫苗研制提供靶基因和靶抗原。方法　根据结核杆菌 H 37Rv株免疫保护性抗原 Ag85 A的基因序列自行设计一对寡核苷酸引物 ,以结核杆菌 H37Rv株基因组 DNA为模板 ,通过 PCR扩增获得具有完整开架读码框 (ORF)的 Ag85 A抗原基因 ,并将其正向插入真核和原核穿梭表达型载体 p BK- CMV构建重组质粒 ,重组质粒转入大肠杆菌后 IPTG诱导表达 ,并对其表达产物进行 Western- blotting分析。结果　PCR扩增获得了具有完整开架读码框的 Ag85 A抗原基因 ;构建了 Ag85 A抗原基因真核和原核穿梭表达型载体 ;Ag85 A抗原基因在大肠杆菌中实现了稳定表达。结论　成功地对结核杆菌免疫保护性抗原 Ag85 A进行了基因克隆与表达 。

摘要：目的筛选并构建与目前STR数据库兼容的SNP-STR遗传标记复合扩增体系,调查其在四川汉族群体中的遗传多态性,并探讨其在混合DNA样本分析中的应用价值。方法以现有商业试剂盒中使用的STR遗传标记为基础,筛选与STR遗传标记相邻的SNP位点并组成SNP-STR遗传标记。运用SNP等位基因设计特异性引物,构建基于等位基因特异性扩增的SNP-STR遗传标记复合扩增体系。调查该体系在四川汉族群体的遗传多态性,并评价不同位点数目的体系对两个体混合DNA样本的检测效能。结果筛选并构建了由13个SNP-STR遗传标记构成的等位基因特异性复合扩增体系。在四川汉族群体中,各位点杂合度为0.76~0.88,累积个体识别率达0.999 999 999 999 999 968。在对两个体混合DNA的分析中:单位点扩增时,混合样本的混合比例达到1 000∶1时依然可以检测到少量成分所特有的分型;多位点复合扩增时,混合比例最大可达500∶1;随着体系中位点数量的增加,对混合DNA中少量成分的检测效能降低。结论SNP-STR遗传标记较STR具有更高的多态性,其构成的复合扩增体系对混合样本的分析效能优于传统的STR复合扩增体系。

摘要：为积极促进学生的优质学习和实践、探究、创新、合作等能力的全面发展,基于"以学为中心"这一先进的教学理念设计了"免疫印迹"实验课程。此课程设计围绕学生的自主知识构建,综合运用主动学习、合作学习、探究式学习、基于问题的学习等多项教学策略,以师生交流平台和学习资料库为前提,创建了课前、课堂、课后三位一体的学习情境,成功地将教学活动的中心由教师转移到学生。

摘要：目的 构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA（mtDNA）16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法 利用引物设计软件（Primer 5）对两个mtDNA序列ND4基因和16srRNA基因设计两对引物，每对引物中的一条在5’端标记荧光素（6-FAM）。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系，用ABIPRISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果 人类DNA扩增产物出现两个峰，片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段，而动物DNA扩增产物出现一个峰，片段大小为149bp。对30个实验室存放5～15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论 该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本，对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。