摘要：用40条10碱基随机引物对油脂化工废水处理系统中分离到的降解脂肪酸和脂肪胺功能菌株FA 2,FA 3及对照菌株进行RAPD分析,筛选出长度为700bp的FA 2的特异性片段,并克隆到pMD18 T载体上.根据测序结果,设计了1对SCAR(sequencecharacterizedamplfiedregion)引物,通过SCAR PCR反应,获得SCAR标记,并通过对20个培养样品进行PCR扩增,验证了标记特异性.结果表明该标记可作为特异的分子标记用于污水处理系统中功能菌株FA 2的监测.

摘要：Chi58是***4产生的一种胞外几丁质酶。通过chiA的特异性PCR引物探测到菌株C4中存在几丁质酶,并将扩增到的几丁质酶基因片段(chiA-F)克隆、测序后,提交GenBank数据库进行同源性搜索。对从GenBank中获得的高同源性序列进行比对,并根据保守区域设计2对PCR引物进行嵌套PCR,扩增出Chi58基因的开放阅读框(ORF)。测序结果表明该酶的ORF由1692个核苷酸组成,编码563个氨基酸,在N端有23个氨基酸的信号肽,其成熟蛋白的分子量应为58.544kDa。对其推导氨基酸的序列分析表明Chi58与沙雷氏菌的几丁质酶(chiA)有高度同源性(88.9%～99.6%),其结构主要包括信号肽序列、PKD结构域和18家族糖苷水解酶结构域。将该基因克隆到pET32a(+)载体构建重组质粒pChi58,转入大肠杆菌BL-21(DE3)进行融合表达。经IPTG诱导后,可见分子量约81.1kDa的融合蛋白的表达。

摘要：以高粱细胞质雄性不育系和保持系 A1Tx6 2 3 A/B,A2 V4 A/B为材料 ,考察了 Mg2 + ,Taq酶 ,d NTP,引物 ,模板等的用量、循环参数及不同的 PCR仪对随机扩增多态性 DNA(RAPD)反应的影响。结果发现 :在 2 5 μL体系中 ,Mg Cl2 2 .0 mmol/L,Taq酶 0 .75 U(1 U=1 μmol/min) ,d NTP0 .1 5mmol/L,引物 1 6 .5 ng,模板 3 0 ng,明胶 0 .0 0 1 % ,KCl5 0 mmol/L,Tris1 0 mmol/L(p H8.3 )为最佳反应混合物组合。对 Peltier Thermal Cycler 2 0 0而言 ,94℃预变性 5 min,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,最后 72℃保温 5 min,共计 40个循环为最佳扩增条件 ;对 Perkin ElmerCetus DNA Thermal Cycler- 480而言 ,采用 94℃预变性 3 min后 ,前 3个循环 ,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,后 3 7个循环 ,94℃变性 3 0 s,3 6℃退火 45 s,72℃延伸 1 min,最后72℃保温 5 min的循环程序可获得理想扩增。并阐述了优化 RAPD实验体系的设计原则。

摘要：目的获取完整的变形链球菌表面蛋白PAc的编码基因 pac。 方法建立扩增长片段目的基因的PCR反应体系 ,根据文献报道的 pac核苷酸序列设计引物 ,使用通用缓冲液和高纯度的质粒 pPC4 1DNA为模板 ,经PCR扩增 pac基因。 结果扩增产物经琼脂糖电泳和分子量鉴定 ,为单一的 4 .7kb条带。结论成功地从质粒 pPC4 1DNA模板上扩增到全长 4 .7kb的完整 pac基因 。

摘要：目的利用Red同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白A(outer membrane protein-A,Omp A)基因缺失株,为后续研究奠定一定的基础。方法以已知大肠杆菌Omp A为靶点在其两端设计同源臂引物,以质粒p KD3为模板利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出氯霉素筛选标记序列,然后采用Red重组技术利用质粒p KD46诱导表达的重组酶通过电击的方法把外源构建打靶片段导入大肠杆菌,构建大肠杆菌Omp A基因缺失突变株。以菌落PCR方法检测基因大小,以蛋白质印迹法检测蛋白表达情况,以重组菌株培养过程的吸光度(A600)值来反映重组子的生长情况。结果成功构建了大肠杆菌Omp A基因缺失突变株,通过蛋白质印迹法检测和细菌生长曲线测定,发现Omp A基因成功完全丢失,突变株的生长曲线与野生型的差异不显著。结论Omp A基因缺失对大肠杆菌的生长无显著影响,为进一步研究疫苗活载体提供了一定基础。

摘要：生态环境高分子是指全生命周期内低环境负荷甚至没有环境负荷的一类环保高分子.作为响应自然呼唤的高分子,生态环境高分子诞生于20世纪90年代高分子工业飞速发展的年代,目前已经成为高分子科学的前沿研究方向.我国学者以可再生资源的单体为核心(但不限于该类单体),从催化剂设计、可控聚合方法、聚合物性能调控、聚合物功能化、物理表征和加工方法等方面取得了一系列重要的创新成果,有力推动了世界范围内该研究领域的发展.本综述以聚乳酸等8类典型生态环境高分子为例,总结和评述了最近30年我国学者在生态环境高分子领域的基础研究进展,并对其未来发展趋势进行了展望.