摘要：目的建立稳定沉默髓样分化因子88基因(MyD88)的大鼠胰腺导管细胞株ARIP。方法设计并构建编码MyD88 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并用三质粒包装系统包装成慢病毒,分别命名为Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2。将ARIP分为未处理组、Lenti-Non Target阴性对照组、Lenti-shMyD88-1组和Lenti-shMyD88-2组。并用相应的病毒转导(未处理组只换液)。经流式分选和抗生素筛选结合的方法筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,测定细胞的转导效率并用real-ti me PCR方法测定沉默效率。结果成功构建了编码表达MyD88的shRNA表达质粒。经流式分选和抗生素筛选后,慢病毒转导效率均达到100%。与未处理组相比,Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2对MyD88 mRNA的沉默效率分别为82.73%±1.203%和75.56%±1.176%。结论建立了MyD88基因稳定沉默的胰腺导管细胞株。为探讨MyD88基因与急性胰腺炎的相关性提供了一个全新的、稳定的、可操作的细胞模型。

摘要：背景:IgA肾病发病机制迄今不明,目前研究证实IgA肾病患者IgA1分子铰链区β1,3-半乳糖基转移酶的活性降低引起IgA1分子O-糖基化异常是该病发生的重要途径。作者前期研究推测IgA肾病患者外周血B淋巴细胞β1,3-半乳糖基转移酶特性伴侣蛋白Cosmc表达降低可能是IgA肾病糖基化异常原因的中心环节。目的:检测IgA肾病患者β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区的DNA序列,并与Gene Bank公布的序列比对。设计:病例-对照观察。单位:四川大学华西医院肾内科。对象:选择2005-11/2006-08四川大学华西医院肾内科收治的肾病患者37例,包括IgA肾病患者27例和非IgA肾病患者10例,另选择5例健康自愿者,所有观察对象均知情同意。方法:实验于四川大学生物治疗国家重点实验室完成。采集所有观察对象的肝素钠抗凝外周静脉血2mL,采用经典酚氯仿法提取外周血基因组DNA,应用紫外分光光度仪定量DNA的含量,应用聚合酶链反应扩增所有观察对象的β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区,并对每个观察对象的聚合酶链反应产物进行直接测序,将所有测序结果分别与GeneBank公布序列一一进行比对。主要观察指标:β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区的聚合酶链式反应产物扩增结果及测序序列。结果:①Cosmc基因的编码区位于Cosmc基因的257-1213位,扩增后的Cosmc基因大小为1247bp。②IgA肾病患者、非IgA肾病患者以及健康自愿者之间的β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区序列均一致,并与GeneBank公布的序列无差异。结论:未发现IgA肾病患者有Cosmc基因编码区序列异常,提示Cosmc基因编码区序列与IgA肾病IgA1分子的糖基化异常可能无关。

摘要：目的设计并合成新型小分子Bcl-2蛋白抑制剂。方法基于已报道的活性小分子,运用Autodock4.2研究其与Bcl-2蛋白的作用模式,并以此设计、合成一系列新型小分子抑制剂,采用MTT法对人肝癌细胞Hep G-2进行体外抗肿瘤活性实验。结果设计合成了11个全新小分子化合物,其结构经~1HNMR和^(13)CNMR确定。结论化合物Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅺ有明显的体外抗肿瘤活性,化合物Ⅵ显示出比较好的体外抗肿瘤活性,高于阳性对照。

摘要：为了分析鼠Tcp11l1基因的结构和表达,从小鼠睾丸组织总cDNA中扩增鼠Tcp11l1基因的开读框架(Open reading frame,ORF),定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建融合表达质粒pTcp11l1-EGFP,转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察Tcp11l1基因的亚细胞定位;设计跨小鼠Tcp11l1基因两个外显子的引物,RT-PCR分析此基因在小鼠各组织中的表达情况.并利用生物信息学的方法对鼠Tcp11l1基因的结构进行初步预测.转染pTcp11l1-EGFP后在胞质中能明显看到绿色荧光信号,而在胞核和胞膜中无绿色荧光信号,表明鼠Tcp11l1蛋白定位于细胞质;RT-PCR分析结果表明,鼠Tcp11l1基因在小鼠各组织中广泛表达.生物信息学结果表明,鼠Tcp11l1和鼠Tcp11的蛋白具有相同的TCP11结构域,不能确定是否存在跨膜序列.鼠Tcp11l1基因和鼠Tcp11基因具有相似的亚细胞定位和TCP11结构域,表明这两个基因可能具有相似的受体功能.但是与Tcp11特异表达于睾丸组织的延长精细胞和精子不同,Tcp11l1为广泛表达,说明Tcp11l1可能在多种组织细胞中发挥作用.

摘要：天然产物作为临床用药的重要组成部分和新药发现的重要来源,已经成为医药领域不可或缺的成员之一。但是传统的天然产物筛选方法在一定程度上制约了新型天然产物的开发,鉴别与改造天然产物的生物合成路径为全新天然产物的发现提供了思路。近年来,生物信息学和合成生物学技术的蓬勃发展为天然产物的探索与改造带来了新的曙光。归纳总结了合成生物学技术相关的基因重组策略和基因簇调控方法,并讨论了其在天然产物研究中的应用及存在的问题。

摘要：目的观察zfp637基因对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法半定量RT-PCR检测zfp637基因在小鼠正常组织与肿瘤细胞株中的表达。设计并合成4对小分子双链RNA，半定量RT-PCR筛选最佳干扰效应位点。将siRNA转染EMT6细胞，转染后144d进行细胞增殖实验。结果zfp637在多数正常组织呈低到中度表达，外周血单个核细胞未见表达。在小鼠肝癌H22，小鼠肝癌细胞Hepal-6，Lewis肺癌LL／2，黑色素瘤细胞B16，淋巴瘤细胞Yac-1和乳腺癌细胞EMT6中均呈现高表达。筛选后表明siRNA-881为最佳干扰效应位点。细胞增殖实验（MTT）显示：转染siRNA后第4d，实验组EMT6细胞增殖明显低于阴性对照组，143d实验组细胞增殖与阴性组相差不明显。结论zfp637基因在不同正常组织和肿瘤细胞株中表达水平不同。zfP637很可能是促进细胞增殖的正调控因素。下调该基因表达能抑制EMT6肿瘤细胞增殖。

摘要：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducingligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,由于它能特异性诱导肿瘤细胞的凋亡而对正常细胞无毒性,因此具有被开发成治疗肿瘤的蛋白质药物的可能性。目前已经有5个与TRAIL相关的受体被鉴定出,其中,TRAILR1和TRAILR2是与诱导细胞凋亡最直接相关的受体,也是最具有前景的药物设计靶点。本文基于TRAIL蛋白及其受体复合物的三维结构分析,阐述TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制以及影响凋亡的因素和途径,对以TRAIL为靶点的肿瘤治疗的研究现状作全面综述,为探索肿瘤生物治疗的新方法和途径提供帮助。

摘要：目的应用新型基因编辑工具CRISPR/cas9（clustered regularly interspaced palindromic repeat/CRISPR-associated system 9）在前列腺癌DU145细胞中部分敲除HIF1α基因，以探讨转录因子HIF1α（hypoxia-inducible factor-1α）的功能及其对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法以HIF1α-exon 1为靶点，设计两条sgRNA序列，构建CRISPR/cas9系统，在前列腺癌DU145细胞中敲除HIF1α基因，并利用CCK8、Transwell实验分析部分敲除HIF1α对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果酶切及测序结果显示HIF1α部分敲除成功。部分敲除HIF1α基因后，其表达水平明显下调，可显著抑制DU145细胞增殖、迁移、侵袭。结论成功构建了HIF1α CRISPR/cas9基因敲除系统，可显著抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移、侵袭能力。该系统可为深入研究HIF1α基因的功能提供新的工具。

摘要：目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)患者血清血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、β2微球蛋白(β2-microglobin,β2-MG)水平与国际预后指数(international prognostic index,IPI)之间的关系。方法:33例初治DLBCL患者按IPI评分分成低危组(IPI<2)和中高危组(IPI≥2),采用ELISA方法检测患者外周血血清中的VEGF、IL-6、bFGF水平,应用放射免疫分析法检测血清β2-MG水平。结果:高危组血清β2-MG、VEGF、bFGF、IL-6水平均较低危组明显升高。结论:血清β2-MG、VEGF、bFGF、IL-6水平可以和IPI一起用于DLBCL患者预后判断,为患者的个体化治疗以及设计新的临床试验提供依据。

摘要：目的比较远端胃癌D2根治术Billroth-Ⅰ式、Billroth-Ⅱ式和Roux-en-Y 1年期上消化道内镜评估结果。方法采用病例-对照研究设计，收集2011年1月至2014年4月期间四川大学华西医院胃肠外科中心接受外科手术治疗行D2远端胃癌根治术的部分胃癌患者的临床病理资料。根据消化道重建方式不同，将患者分为Billroth-Ⅰ组、Billroth-Ⅱ组和Roux-en-Y组，比较3组患者的术后恢复指标及术后1年期上消化道内镜评估结果。结果除Roux-en-Y组的手术时间（268.4±43.9）min较Billroth-Ⅰ组（228.2±46.4）min及Billroth-Ⅱ组（245.0±38.0）min明显延长外（P= 0.034），3组患者其他临床病理资料比较，差异无统计学意义（均P〉 0.005）。术后除进食流质饮食时间3组间差异无统计学意义（P= 0.086）外，Billroth-Ⅱ组胃管拔除时间、引流管拔除时间及肛门排气时间均较另外两组明显延长。Billroth-Ⅰ组，Billroth-Ⅱ组及Roux-en-Y组术后30 d天并发症发生率分别为25.0% （5/20）、40.0% （8/20）和25.0% （5/20），差异无统计学意义（P= 0.490），术后并发症发生的类型3组间差异也无统计学意义（P= 0.180）。术后1年期上消化道内镜评估结果：Billroth-Ⅱ组胆汁反流发生率为35.0% （7/20），Billroth-Ⅰ组为25.0% （5/20），Roux-en-Y组为5.0%（1/20），差异无统计学意义（P= 0.067）；无残胃炎发生（评分为0）患者的比例，Billroth-Ⅰ组为25.0%（5/20），Billroth-Ⅱ组15.0% （3/20），Roux-en-Y组50.0%（10/20），差异有统计学意义（P= 0.024）。结论Roux-en-Y式重建虽然较Billroth-Ⅰ式及Billroth-Ⅱ式重建显著延长手术时间，但其并没有增加围手术期并发症发生的风险；且在控制远期残胃炎及胆汁反流上存在一定优势，可考虑在临床实践中推广。