摘要：为了探讨穿心莲转录组中SSR位点信息及其所在基因的生物学功能,并为开发穿心莲分子标记奠定基础,该研究以穿心莲转录组测序获得的43 683条Unigene为对象,采用Micro SAtellite（MISA）软件分析其中的SSR位点信息,并利用Primer3.0软件对符合鉴定要求的SSR基元设计引物和进行初步验证,同时用Blast软件对含SSR的Unigene进行功能分析。结果显示,在穿心莲转录组中共搜索到14 135个SSR位点,分布于9 973条Unigene中,SSR位点出现频率为32.36%。二核苷酸和三核苷酸是SSR序列中最主要的重复类型,共占SSR总数的75.54%。SSR所包含的重复基元中,AT/AT和CCG/CGG分别是二核苷酸和三核苷酸的优势重复基元类型。通过设计、筛选,共获得4 740对具有潜在多态性的SSR引物组合,随机挑选的20对引物中有10对可以扩增出与预期大小吻合的条带。通过基因功能注释发现,含SSR的Unigene主要与穿心莲的基础代谢功能相关。以上结果表明,穿心莲转录组中SSR位点出现频率高、类型丰富、多态性潜能较高,同时SSR序列的功能分析也为穿心莲功能基因的定位研究和分子标记辅助育种提供了有利参考。

摘要：目的:探讨当归挥发油提取方法。方法:采用正交设计优选水蒸气蒸馏-薄荷脑萃取法提取当归挥发油提取工艺。结果:水蒸气蒸馏-薄荷脑萃取法提取的当归挥发油的主要成分是藁本内酯,其得率为5‰。结论:水蒸气蒸馏-薄荷脑萃取法可用于当归挥发油的提取。

摘要：目的:确定骨友灵凝胶剂的制备工艺。方法:采用正交设计方法进行骨友灵凝胶的处方筛选,确定最佳处方,采用体外透皮方法对制剂处方进行透皮吸收研究。结果:确定骨友灵凝胶最佳处方工艺为:取40 ml骨友灵浸膏,加入11 g泊洛沙姆407、月桂氮艹卓酮3 ml、丙二醇5 ml、乙醇25 ml,加适量水至100 ml。体外透皮实验结果显示前12 h搽剂与凝胶剂累积释放量相当。结论:骨友灵凝胶工艺简便、可行。

摘要：目的阳春砂是中药砂仁的主要来源植物,其转录组中已筛选出预测与萜类合成相关的候选转录因子unigene,对其进行克隆、序列分析和原核表达,以进一步认识阳春砂药效物质萜类合成的调控元件。方法根据阳春砂转录组数据中预测为AvMYC4b的Unigene0074125序列设计特异引物,提取阳春砂叶片RNA并反转录成c DNA,以此为模板经PCR扩增得到AvMYC4b的核心片段,再通过RACE技术获得全长c DNA,然后进行编码区全长的GATEWAY TOPO克隆。通过LR反应构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖在16℃下培养诱导融合蛋白表达,收集菌体,经过裂解、超声、纯化,用SDS-PAGE检测蛋白表达结果。结果克隆获得的AvMYC4b全长有2 579 bp,包含195 bp的5’UTR,1 995 bp的ORF和389 bp的3’UTR,编码664个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为72 211。经过生物信息学分析,AvMYC4b氨基酸序列与其他植物的MYC相似,含有转录因子MYC家族的保守结构域,预测可定位于细胞核中。成功构建重组表达载体p DEST17-AvMYC4b并转化Rosetta(DE3)细胞,经诱导表达得到AvMYC4b融合蛋白,SDS-PAGE结果显示蛋白相对分子质量约80 000,与预测相符。结论从阳春砂中克隆得到b HLH家族转录因子AvMYC4b,并建立了AvMYC4b原核表达系统,为该转录因子的生物功能研究奠定了基础。

摘要：G-box结合蛋白(GBF)是一类识别并结合G-box的转录因子,广泛地参与植物基因响应外界刺激的表达调控。本研究采用FPNI-PCR克隆了广藿香醇合酶(PTS)的启动子,并对其序列进行分析,发现其含有G-box等顺式作用元件。为发掘潜在的转录因子,设计引物扩增广藿香中的GBF基因,克隆得到7个GBF基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的GBF均含有bZIP类保守结构域,分别命名为PatbZIP1、PatbZIP2、PatbZIP3、PatbZIP4、PatbZIP5、PatbZIP6、PatbZIP7。通过实时荧光定量PCR技术检测了PatbZIPs在不同组织的表达情况,结果显示出这些GBF在广藿香中的表达量各不相同,有些在不同组织的表达量具有明显区别,表明这些GBF在广藿香生长发育中可能具有不同的功能。这些结果为进一步解析广藿香GBF的功能和作用机理积累了有价值的资料,也为分析GBF与广藿香基因表达调控的关系提供了参考。

摘要：紫杉醇(paclitaxel,商品名Taxo1)首先由W ani等从短叶红豆杉(Taxus brevifolia)树皮中分离得到并确定了其化学结构[1]。紫杉醇作为一种抗癌药是继阿霉素后最热点的抗癌新药,对晚期卵巢癌、转移性乳腺癌和非细胞性肺癌等多种癌症有显著疗效。目前,生产紫杉醇的原料主要来源于红豆杉树皮,由于树皮为不可再生资源,供应有限,而叶片中紫杉醇含量又很低,导致提取紫杉醇原料匮乏。分布于北美加拿大的自然杂交种曼地亚红豆杉(Taxus m edia)不仅树皮中含有紫杉醇,且4~5年生植物的叶子中紫杉醇的含量与生长70~80年天然红豆杉树皮含量相当[2]。曼地亚红豆杉为灌木植物,枝叶萌发力强,生物量大,已成为关注热点。本试验应用正交设计,以价格低廉无污染的乙醇为溶剂,探索微波提取曼地亚红豆杉中紫杉醇提出量的优选工艺。1材料与方法1.1实验材料紫杉醇对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号为:1534-200001;曼地亚红豆杉枝叶由辽宁华源本溪三药有限公司桓仁曼地亚种植基地提供;天水华园HWC3L-A专用微波提取器,Agilent 1100自动进样高效液相色谱仪;甲醇、乙腈为色谱纯,水为二次纯化水。1....

摘要：目的获得药用植物阳春砂Amomum villosum萜类合酶基因Av BPPS(bornyl diphosphate synthase)、AvLIS(linalool synthase)和AvHUS(humulene synthase)的启动子,探究其顺式作用调控元件参与萜类合成的调控。方法从阳春砂叶片基因组DNA(genomic DNA,gDNA)中分别克隆获得AvBPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA序列,据此设计特异引物,再通过FPNI-PCR(fusion primer and nested integrated PCR,FPNI-PCR)方法分别克隆其启动子并进行生物信息学分析,结合转录组及对应萜类含量数据,分析其较为关键的顺式作用调控元件与萜类调控的关系。结果获得Av BPPS、AvLIS和AvHUS的gDNA长度分别为2374、2295、2362 bp,均包含相应基因的完整编码区和7个外显子。进一步克隆获得470、934、762 bp的启动子。AvBPPS启动子含有参与胚乳表达的顺式作用调控元件GCN4-motif,结合基因表达量的分析,该顺式作用调控元件调控了AvBPPS在阳春砂药用部位种子中的特异表达,进而影响了主要药效萜类成分龙脑、乙酸龙脑酯等在种子中的积累。AvLIS和AvHUS启动子均含有参与茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)反应的顺式作用调控元件,转录组和萜类含量的分析显示AvLIS响应高浓度MeJA的诱导,而AvHUS没有表现出对MeJA的响应。结论首次从药用植物阳春砂的启动子中发现了参与胚乳表达和MeJA反应的调控元件,为深入探究萜类合成关键酶的种子表达特异性和对MeJA响应的机制提供了基础,为萜类代谢的调控提供了操作元件。

摘要：目的以星点设计-效应面法筛选并优化硝苯地平缓释微丸包衣处方,量化Eudragit RL/RS用量及比例与释放度之间的关系,为硝苯地平缓释微丸胶囊的研究提供参考。方法采用层积上药法制备含药丸芯,流化床包衣制备缓释微丸。以释放度作为考察指标,将Eudragit RL/RS比例和包衣增重为自变量,采用星点设计-效应面法优化包衣处方,并对模型进行验证。结果包衣液中Eudragit RL/RS的配比、包衣增重量对释放度影响显著。二次方模型是描述指标与因素之间的最佳模型。当Eudragit RL/RS的包衣增重量为15%,Eudragit RL/RS的配比为4:6时,制备的硝苯地平缓释微丸能维持12 h持续释药,释药速率实测值与预测值的偏差<10%。结论星点设计-效应面法可用于硝苯地平缓释微丸包衣处方的优化,所建模型具有较好的预测能力和实用性。

摘要：目的:建立一种用近红外光谱法快速测定气滞胃痛颗粒水提过程指标成分含量的新方法。方法:运用偏最小二乘法建立近红外光谱与芍药苷HPLC测定值之间校正模型,并对未知样本进行含量预测。结果:校正模型相关系数达到0.985 9,预测相关系数达到0.981 8,其RMSEC和RMSEP分别为0.203、0.257,RSEP为7.69%。结论:该方法操作简便、快速无损、准确可靠,可用于气滞胃痛颗粒提取过程指标成分含量的快速监测。

摘要：目的优选当归破壁粉的制备工艺,并进行质量评价。方法建立当归中5种活性成分阿魏酸、洋川芎内酯I、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞的HPLC测定方法;采用Box-Behnken响应面设计法对粉碎时间、粉碎温度和投料量进行考察,以当归破壁粉的粒径分布(D90,累计粒度分布数达到90%时所对应的粒径)和5种活性成分含量值作为响应值来构建响应面模型,在D90<45μm前提下,对5种活性成分含量做最大值求算,确定最优的当归破壁粉制备工艺参数;以D90、不均匀系数、粒径分布宽度、松装密度、振实密度、颗粒间孔隙度、卡尔指数、比表面积、孔体积、豪斯纳比、休止角、干燥失重和吸湿性13个物理指标构建当归破壁粉的物理指纹图谱,评价最优工艺制备的3批当归破壁粉的相似度。结果5种活性成分HPLC测定方法的精密度、重复性和稳定性等方法学考察结果符合指导原则要求。Box-Behnken响应面优选的工艺参数为粉碎时间35 min、粉碎温度−10℃,投料量580 g。最优工艺制备的3批当归破壁粉5种活性成分含量和响应面拟合结果之间的RSD值均小于3%,物理指纹图谱相似度均在0.994以上。结论Box-Behnken优选的当归破壁粉制备工艺方法在保留活性成分尤其是挥发性成分含量方面具有明显优势,物理指纹图谱作为评价中药粉体物理属性质量一致性的工具有较好的实际效果,两者结合应用有助于实现更高的中药破壁粉生产质量控制水平。