摘要：RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点。miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具有优势。本研究探索以人工miRNA结构引发vif37靶点对应的RNAi。本研究以天然的miR-155前体为骨架,采用步移的方式设计了3个靶向vif37的人工miRNA,以RNA聚合酶Ⅱ类启动子指导表达。miRNA表达质粒和HIV-1的感染性克隆pNL4-3共转染的结果显示,3个人工miR-NA中只有miR-vif37H具有抑制效果,效率与shRNA-vif37相当。与携带靶序列的荧光素酶报告质粒共转染实验证明miR-vif37H具有良好的抑制特异性。用表达miR-vif37H的重组慢病毒转导HIV-1的敏感细胞MT-4,克隆化后获得稳定表达miR-vif37H的细胞株MT-4-miR37H,该细胞可以有效抑制HIV-1的体外复制。实时RT-PCR检测结果显示,与shRNA-vif37相比,miR-vif37H的表达水平明显下降,安全性更好。进一步的实时RT-PCR检测结果还显示,miR-vif37H在细胞内的稳定表达不会影响内源代表性miRNA(miR-181和miR-16)的加工以及干扰素应答相关基因Stat1的mRNA水平。miR-vif37H是一个特异的高效RNAi元件,为vif37靶点的进一步应用研究奠定了基础。

摘要：RNAi技术在抗HIV-1治疗研究中已显示出巨大潜力,获得可高效特异抑制HIV-1的RNAi元件是进行相关研究的重要基础。miRNA在抑制和表达方式上相比siRNA具有更多的优势。本研究即探讨构建可高效特异靶向HIV-1的人工miRNA元件。选择以保守性较好的HIV-1pol基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,设计了16个可靶向pol区高保守区段的RNAi靶点,构建表达载体与HIV-1感染性克隆进行共转染抑制实验,筛选显示pol1026序列兼具高保守性及高抑制效率特点。以天然miR-30a为基础骨架构建了靶向pol1026靶点的人工miRNA元件,通过与HIV-1感染性克隆质粒的共转染抑制实验验证获得了可有效抑制HIV-1表达的人工miRNA元件(miR-1026E)。通过与携带靶序列的报告质粒的共转染实验证明miR-1026E具有良好的靶点特异性。本研究进一步构建了携带miR-1026E表达元件的重组慢病毒,转导MT-4细胞并对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合miR-1026E表达元件的MT-4-miR1026E细胞克隆,该细胞在体外攻毒实验中可高效抑制HIV-1的复制,具有显著的抑制HIV-1的能力。同时应用实时RT-PCR方法检测显示,miR-1026E在细胞中不会影响内源性代表miRNA(miR-181与miR-16)的表达水平和干扰素效应相关基因stat1的表达水平,具有良好的特异性。所获得的可特异高效抑制HIV-1复制的人工miRNA元件可为抗HIV-1研究提供重要参考。

摘要：探讨一种用于乙型肝炎病毒（HBV）基因组扩增的灵敏度高、广谱性好的巢式聚合酶链式反应（nested PCR）方法，适用于较低病毒拷贝数标本的HBVDNA扩增．通过设计两套通用巢式引物。实现对各基因型（A，B，C，D，E，G）HBV均具有较高的扩增效率；采用两步法分段扩增HBV基因组，对两段目的产物进行测序拼接获得HBV的全基因序列．应用本方法对4组病毒拷贝量（IU／mL）分别为：〉1．0×10^4，1．0×10^3～1．0×10^，2．0×10^2～1．0×10^3，〈2．0×10^2的100份血清标本进行全长基因组扩增，其中75份获得阳性结果，各组阳性率依次为：100％，66．7％，60％，25％．有效扩增灵敏度为2．0×10^2～1．0×10^3IU／mL；而一步法只在病毒拷贝量〉1．0×10^4 IU／mL的标本组中获得15份阳性结果，总的阳性率仅为15％，说明该方法扩增灵敏度明显高于一步法．因此。本方法为HBV流行病学调查研究HBV基因组序列提供了更高的灵敏度，可在流行病学调查中发挥重要作用．

摘要：建立了一种快速检测HTLV-I前病毒的荧光定量方法。利用HTLV前病毒DNA序列设计特异性TaqmanMGB探针及引物对目标DNA片段进行实时检测,用含目标片段质粒构建标准曲线。该定量检测方法在10^3~10^7copy/μL范围内与Ct值呈良好线性关系（R2可达0.999）,最低检测浓度为5copy/μL。利用该系统对献血者血液标本进行HTLV前病毒初筛确认及定量检测,结果表明该方法重复性良好,特异性高,适用于献血者和临床标本的检测和确认,亦可用于对HTLV病毒载量与成人T细胞白血病等疾病的关联性进行研究。

摘要：RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒。通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征。通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA-vif37具有vif基因抑制特异性。带有shRNA-vif37表达元件的重组慢病毒转导后的MT-4细胞在HIV-1NL4-3体外攻毒实验中可显示出较有效的抑制病毒复制的能力,本研究进一步对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合shRNA-vif37表达元件的MT-4-vif37细胞克隆,该细胞具有显著的抑制病毒复制的能力,在高攻毒剂量下仍可获得良好的抑制效果。本研究为进一步应用RNAi技术进行新型艾滋病治疗方法研究提供了重要基础。

摘要：带状疱疹是由潜伏在神经节的水痘一带状疱疹病毒再激活引起的急性感染性皮肤病。老年人是带状疱疹发病的高危人群，随着我国人口老龄化程度日益加重，带状疱疹研究应受到重视。本文就带状疱疹病原学特征、临床诊断、流行病学特征、疾病负担、危险因素及防控措施的研究进展进行了综述。

摘要：随着微流控技术越来越广泛的应用于生物医药、化学分析等领域,该技术的实现载体——微流控芯片成为了研究热点和难点,而微阀作为芯片内流体控制的关键部件,其性能直接决定了芯片的可用性。为了实现芯片液路切换和密闭性等功能,同时在保证可靠性的前提下兼具通用性和低成本,提出了一种可靠性高、通用性强且成本低廉的机械式旋转微阀,其结构保证了自密封性。通过外部设备驱动旋转,可以精确控制多个流道通路的开闭和切换,通过机械接口的设计,其易于集成在多类微流控芯片上。通过静力学仿真分析和气密性实验。结果表明:微阀结构预紧力分布均匀,密封垫片变形合理,在0.16 MPa的截止压强范围内可以实现零泄露,验证了微阀的有效性和可用性。

摘要：水痘带状疱疹病毒(VZV)初次感染可引发水痘并可长期潜伏在宿主神经节内,一旦再激活即可引起带状疱疹.VZV病毒具有疱疹病毒典型结构,从内向外依次是DNA核心、衣壳、皮层和囊膜.VZV皮层是核衣壳与囊膜之间一层无固定形状的蛋白层.VZV皮层由多种蛋白组成,但种类和功能仍未全部确定.本文综述了目前已发现的VZV皮层蛋白在病毒感染过程中发挥的多种作用,讨论了VZV皮层蛋白相关的蛋白-蛋白相互作用及其对病毒在SCID-hu人鼠嵌合感染模型中组织趋向性的影响,这将有助于更好地理解VZV皮层蛋白是如何帮助病毒DNA复制、逃避宿主免疫反应和致病.

摘要：趋化因子CCR5是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,通过抑制CCR5的表达可以在一定程度上阻断HIV-1的复制进程.miRNA介导的RNA干扰相比经典的siRNA在应用中具有更多的特点.本研究的目的是构建可特异有效靶向CCR5的人工miRNA元件.本研究以CCR5基因序列为模板设计了14个miRNA靶序列,以天然miR-30a为基础骨架通过靶序列区替换构建人工miRNA元件.通过将miRNA表达质粒与携带靶序列区的报告质粒的共转染抑制实验检测不同miRNA的抑制效率,结果显示miCCR-13A具有较好的抑制效率和特异性.进一步将miCCR-13A表达载体转染CCR5阳性的HIV-1受体细胞株TZM-b1,RT-PCR检测显示miCCR-13A可在细胞中获得有效表达,同时应用免疫流式细胞术检测显示在miCCR-13A转染细胞相比对照细胞的CCR5蛋白的检测活性明显降低.进一步的研究显示miCCR-13A在细胞中不会影响细胞活性和干扰素效应相关基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特异性.本研究获得的可特异靶向CCR5的人工miRNA元件可为进一步的抗HIV-1研究提供重要基础.

摘要：人呼吸道合胞病毒（Human respiratory syncytial virus,hRSV）是一种可以引起严重下呼吸道疾病的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫力低下者。目前尚无针对RSV的疫苗和特异性抗病毒药物。20世纪60年代,用RSV的福尔马林全病毒灭活疫苗（FI-RSV）免疫的婴幼儿发生了免疫后RSV疾病增强的症状,其特征为免疫后当再次发生天然感染时会引起高热、支气管肺炎和哮喘,从而引发了更高的住院率,并最终导致两名FI-RSV免疫接种后感染RSV的幼童死亡。增强的RSV疾病（Enhanced RSV disease,ERD）主要表现为支气管周围以嗜酸性粒细胞为主的过量的单核细胞浸润以及非保护性抗体应答和细胞毒性T淋巴细胞功能异常等免疫反应。近年来,RSV研究领域正发生着重大变化,许多具有新颖设计的候选疫苗正在纷纷进入临床试验,因此我们要更加重视对ERD发生机制和临床特征的理解和分析。本文提供了对ERD发生机制的概括性描述,并对ERD作为新型候选疫苗的重要评价指标进行了讨论。