摘要：目的:建立氢氧化铝佐剂的鲎试剂凝胶法检测方法。方法:按《中国药典》2020版通则1143细菌内毒素检查法,采用3种缓冲液、钙镁离子添加剂正交设计进行干扰预试验;2个厂家的鲎试剂对不同批号氢氧化铝佐剂进行干扰试验、样品处理的有效性验证。结果:通过干扰预试验,筛选到排除干扰条件。在验证条件下,氢氧化铝佐剂以PBS缓冲液、钙镁离子添加剂排除干扰,对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论:建立的凝胶法检测方法用于检查氢氧化铝佐剂的细菌内毒素可行。

摘要：单克隆抗体(简称单抗)作为治疗性生物制品中发展最为迅速的一类药物,已广泛应用于多种疾病治疗。虽然抗体在临床上显示了其巨大的应用价值,但人类疾病的广度和复杂性督促我们不断寻求新作用方式的新型药物,避免仅仅局限于单抗这一类蛋白质药物。这其中,抗体Fc融合蛋白药物正成为新的研发热点,并且在众多人类疾病治疗方面都显示出巨大的临床应用前景。目前已上市的抗体Fc融合蛋白通常以受体和配体间的相互作用为主要设计策略,进而开发出更加安全且有效的临床药物。本文将对抗体Fc融合蛋白配受体间相互作用这一药物设计策略以及应用进行探讨。

摘要：目的优化CHO DG44细胞的电转染条件,提高细胞的转染效率。方法采用电转染的方法将p EGFP-1质粒转入CHO DG44细胞内,利用L9(33)正交试验设计,对质粒量、电压和电容3因素进行优化,流式细胞仪检测不同条件下的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性率和GFP的平均荧光强度,台盼蓝染色对细胞进行计数,了解细胞生长情况。结果 3个因素中,电压对转染效率影响最大,其次为电容,质粒浓度影响最小。质粒量8μg、电压300 V、电容900μF为最佳电转染条件。结论优化了CHO DG44细胞的电转染条件,为外源基因转染CHO DG44细胞表达重组蛋白提供了基础数据。

摘要：目的 分析诺如病毒(norovirus,NoV)GⅠ和GⅡ基因群内5种优势流行基因型(GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17)间的抗体交叉反应性和交叉阻断活性,为NoV疫苗的研发路线和疫苗临床研究设计提供基础数据。方法使用经铝佐剂吸附的NoV GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)和佐剂对照品免疫小鼠,抗原剂量为3μg/只,第28天加强免疫1次,第56天处死小鼠,采集血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中各型NoV特异性IgG抗体,以基于ELISA法的受体结合阻断试验检测各型NoV阻断抗体。结果 GⅠ. 1型和GⅡ基因群各型间交叉反应IgG抗体GMT均小于或接近cut-off值(滴度=40)。GⅡ各型间,GⅡ. 2和GⅡ. 3VLP免疫小鼠后,均可诱导针对其余型别的交叉反应IgG抗体,各组GMT在494~2 792之间。GⅡ. 4 VLP可诱导GⅡ. 2 IgG抗体(GMT=1 660),以及较低水平的GⅡ. 3(GMT=226)和GⅡ. 17(GMT=147)IgG抗体。GⅡ. 17 VLP可诱导GⅡ. 2(GMT=6 401)和GⅡ. 3(GMT=830)IgG抗体。GⅠ. 1型和GⅡ各型间交叉阻断抗体GMT均小于cut-off值(BT50=20)。在GⅡ各型间,交叉阻断抗体阳性的分别为:GⅡ. 2 VLP免疫血清对于GⅡ. 3和GⅡ. 4,GⅡ. 3VLP免疫血清对于GⅡ. 2,GⅡ. 4和GⅡ. 17 VLP免疫血清对于GⅡ. 2和GⅡ. 3;上述阻断抗体GMT均在31~73之间,且各组间针对同一型别的交叉阻断抗体GMT差异无统计学意义。GⅡ. 2、GⅡ. 3和GⅡ. 4均无针对GⅡ. 17的交叉阻断活性。结论 NoV GⅠ基因群和GⅡ基因群间不存在抗体交叉反应性和交叉阻断活性,而GⅡ群部分型别间存在有限的抗体交叉反应性和交叉阻断活性。

摘要：促进科技成果转化是实现科技强国的重要途径。目前我国科技成果转化率不高,原因有多种,其中对科技人员的激励不足是重要原因之一。本文将对我国科技成果转化过程中遇到的问题及原因进行分析,并以国有科技型企业Y公司的试点科研项目为例,就科研项目收益分红激励的方案设计要点、积极作用以及应注意的问题进行分析,希望能够为国有科技型企业开展同类科研项目收益分红激励方案设计提供参考。

摘要：目的原核表达H7N9流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)球状区,并评价其免疫原性。方法根据H7N9流感病毒HA晶体结构,设计含有2对和3对二硫键的球状区结构域HA1S(62-284 aa)和HA1L(57-289 aa),扩增后连接至pET-21b(+)载体,构建重组表达质粒pET-21b(+)-HA1S和pET-21b(+)-HA1L,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体经复性和柱层析纯化获得球状区蛋白。纯化的目的蛋白分别以CpG X1、Al(OH)_3和CpG X1+Al(OH)_3为佐剂免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清抗体水平和中和抗体水平,评价其免疫原性。结果重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确。两个目的蛋白能在大肠埃希菌中表达,经稀释复性和柱层析纯化后均为单体,HPLC检测纯度均大于95%。动物试验结果表明,单独使用CpG X1或Al(OH)_3不能增强免疫应答,同时使用CpG X1+Al(OH)_3能将IgG抗体水平提高3倍左右。体外假病毒中和试验结果表明,中和抗体水平均较低。结论在大肠埃希菌中高效表达了H7N9 HA1S和HA1L两个蛋白,纯化后的蛋白为均一稳定的单体,且具有一定的免疫原性,为进一步研发快速生产H7N9流感病毒基因工程疫苗提供了参考。

摘要：目的研制安全有效的肠道病毒71型(enterovirus 71,EV-A71)灭活疫苗,预防EV-A71感染所致疾病.方法通过比较不同临床EV-A71分离毒株免疫家兔后的免疫原性和细胞传代适应性,筛选EV-A71灭活疫苗生产毒株;建立多步层析纯化工艺,获得高纯度、高比活EV-A71抗原;采用随机双盲、多中心、试验疫苗与安慰剂对照优效性设计方案,在6~35月龄健康婴幼儿中接种2剂、3个批次EV-A71疫苗,观察对照组和疫苗组EV-A71及其他肠道病毒感染所致疾病发生病例数,计算疫苗保护效果.分析疫苗免疫原性、批间一致性和交叉免疫原性.结果依据中和抗体水平将087株确定为疫苗生产株.经超滤浓缩、柱层析纯化后,疫苗抗原目的蛋白纯度达95%以上、比活达800U/μg以上.第一年内疫苗对EV-A71所致住院/重症病例保护率为100.00%、对EV-A71所致手足口病保护率为90.93%、对EV-A71感染所致疾病保护率为81.85%;两年内对EV-A71感染所致手足口样疾病、手足口病的保护率达到95.00%,对EV-A71感染所致疱疹性咽峡炎、疱疹性口腔炎保护率达100.00%,对EV-A71感染所致住院/重症病例保护率达100.00%;但对CV-A16及除EV-A71、CV-A16外其他肠道病毒所致疾病未显现出明显的交叉保护作用.免疫前中和抗体阴性人群,EV-A71疫苗免疫后第56天,EV-A71中和抗体阳转率达到91.7%以上,中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)达到325.3.3批次试验疫苗接种人群间首针免疫后第56天GMT比值的95%可信区间均在等效区间0.67~1.5内,提示3个批次试验疫苗具有较好的一致性.结论EV-A71疫苗对EV-A71感染所致疾病具有较好的保护效果.

摘要：目的研究我国人群中诺如病毒(norovirus,NoV)GⅠ.1和GⅡ.4型特异性IgG、IgA和组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)阻断抗体水平,从血清学角度认识我国诺如病毒流行情况,为疫苗研发、临床实验和疫苗免疫策略的设计提供数据参考。方法采用间接ELISA法和HBGA受体阻断试验,对采集自广州、襄阳和烟台的839份自然人群(年龄跨度为6月龄至88周岁)血清中NoV特异性IgG、IgA和HBGA阻断抗体进行检测并对检测结果进行统计学分析。结果人群NoV GⅠ.1和GⅡ.4型特异性IgG抗体总阳性率为91.9%和93.0%,IgA抗体总阳性率为48.6%和75.6%,HBGA阻断抗体效价分别为5.04(95%置信区间:4.63~5.49)和18.15(95%置信区间:16.11~20.44)。IgG和IgA抗体阳性率均随年龄呈上升趋势。各年龄组GⅠ.1和GⅡ.4特异性IgG抗体阳性率范围分别为79.2%~100.0%和76.7%~100.0%,其中0.5~<1岁为81.7%和85.0%,1~<2岁为79.2%和76.7%,至12~<18岁增加至98.1%和96.3%,其后分别维持在96%和98%以上。各年龄组GⅠ.1特异性IgA抗体阳性率范围为11.7%~93.8%,其中0.5~<1岁为11.7%,随年龄增加快速上升,至45~<60岁和≥60岁达到93.3%和93.8%;GⅡ.4型特异性IgA抗体阳性率范围为50.8%~88.8%,其中0.5~<1岁为50.8%,12~<18岁开始达到并保持在86.7%~90.7%。GⅠ.1型HBGA阻断抗体效价总体呈随年龄上升趋势,其中0.5~<12岁各年龄组抗体效价显著低于18岁及以上各年龄组(GMT:2.98~4.07 vs 8.21~11.62,P<0.001),12~<18岁年龄组抗体效价显著低于45岁及以上各年龄组(GMT:5.21 vs 11.03~11.62,P<0.05),差异均有统计学意义;GⅡ.4型HBGA阻断抗体效价未见明显的随年龄变化趋势,仅在2~<5岁和22~<45岁人群间具有统计学差异(GMT:26.73 vs 11.87,P<0.01)。结论获得了我国中东部地区人群血清中NoV GⅠ.1和GⅡ.4型特异性IgG、IgA和HBGA阻断抗体数据,揭示了其在不同年龄组的分布规律,为我国NoV疫苗的研发提供了初步的血清流行病学资料。

摘要：工艺平面布局是生物安全实验室工程设计和建设的重要组成部分,在符合风险控制要求的前提下,满足功能需求是实验室工艺布局设计的首要目标。文章通过实际案例,结合国内外现行标准,从功能需求角度对高级别生物安全实验室的工艺布局思路进行了探讨,分析高级别生物安全实验室功能用房的组成、面积规划、实验设备与房间功能的结合等问题,希望能对同类项目的实施提供指导和借鉴。

摘要：呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是造成婴幼儿与老年人下呼吸道感染和住院的主要原因之一。目前开发疫苗、抗体及药物成为防控RSV的热点,其主要靶点是融合蛋白(fusion glycoprotein, F)。本文分析了现有RSV病毒株融合蛋白的变异情况,剖析了融合蛋白的结构特点,并针对融合蛋白的单克隆抗体及小分子药物的结合部位及逃逸情况进行了综述,以期为设计广谱、高效的RSV疫苗及药物提供参考。