摘要：背景目前在我国关于免疫缺陷病相关疫苗衍生性脊髓灰质炎(iVAPP)的病例报道少见。目的总结iVAPP的临床表现、免疫学指标及转归。设计病例系列报告。方法纳入2018年5月至2023年6月在复旦大学附属儿科医院临床免疫科住院的iVAPP患儿,截取患儿的人口学资料、接种脊髓灰质炎病毒(PV)疫苗的相关情况、临床表现、发病时免疫相关指标、病原学检测结果、治疗、转归和肌力恢复情况。主要结局指标临床表现和免疫相关指标。结果4例iVAPP患儿均为男孩,发病年龄为7~12月龄,处于口服脊髓灰质炎病毒疫苗(OPV)4~7个月后;首剂均在3月龄接种OPV,例1、2、4分别接种OPV 1、2、3剂,例3接种OPV 2剂、灭活脊髓灰质炎疫苗(IPV)1剂。2例为联合免疫缺陷病相关疫苗衍生性脊髓灰质炎(CID-VAPP),因“肺部感染、腋下淋巴结破溃”入院,T、B细胞数量均严重降低,呈现多部位肢体瘫痪,存在多侧肢体的肌力减退,积极治疗后未发生缓解;感染累及部位多,感染病原种类多,均发生卡介苗相关结核分枝杆菌感染、重症肺炎,在1周岁内因严重感染死亡。2例为原发性抗体缺陷病(PAD)-VAPP,因“肢体活动障碍”入院,仅B细胞数量降低和抗体分泌障碍,肢体瘫痪症状可累及一侧或双侧,经治疗后肌力可恢复正常,且感染症状轻,预后良好。结论CID和PAD患儿口服OPV均有可能导致iVAPP,患儿的预后主要取决于原发病。

摘要：目的用结核分枝杆菌(***)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重组质粒p ET32a-Rv3117,转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3)PLys S,诱导表达并纯化目的蛋白,用Triton X-114相分离法去除目的蛋白中的内毒素,然后与DDA/MPL佐剂充分乳化构建亚单位疫苗。C57BL/6小鼠随机分为对照组(未予任何处理)、PBS组(免疫PBS)、BCG组(单纯首次免疫BCG)、BCG+DDA/MPL组(首次免疫BCG,2周后用佐剂DDA/MPL加强免疫2次)和BCG+Rv3117/DDA/MPL组(首次免疫BCG后用亚单位疫苗Rv3117加强免疫2次),每组5只。分别采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果成功克隆表达并纯化结核特异性抗原Rv3117。ELISPOT和ELISA结果显示:受10.0μg/m L结核菌素纯化衍生蛋白(PPD)刺激后,与对照组、PBS组、BCG组和BCG+DDA/MPL组比较,BCG+Rv3117/DDA/MPL组小鼠T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平明显升高(P<0.05);BCG+DDA/MPL组培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12p70)细胞因子水平均显著高于对照组和PBS组(P<0.05),总抗体Ig G和Ig G1亚型水平亦较高;而BCG+Rv3117/DDA/MPL组上述指标水平均显著优于BCG+DDA/MPL组(P<0.05)。结论亚单位疫苗Rv3117/DDA/MPL在C57BL/6小鼠体内可增强BCG的细胞免疫和体液免疫效应。结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117有望成为新的结核疫苗设计及结核诊断的候选抗原。

摘要：PBL病案的优劣直接影响了PBL小组讨论的进展顺利与否以及讨论的效率高低。本研究针对PBL教学病案的设计、撰写过程进行探索,对医疗信息进行整合,用结构化的电子软件系统设计病案,探索PBL病案智能化的撰写流程和质量监督方法,逐步实现从PBL个案到系统的PBL案例以至于形成PBL教材,为医学教学服务。

摘要：PBL病案的优劣直接影响了PBL小组讨论的进展顺利与否以及讨论的效率高低,因此上海医学院对PBL病案的进一步规范化设计以及质量监控开展了初步研究。结果显示学生对病案的总体满意度较高,但在对激发学生兴趣、生动性、提供足够的深度和广度供学生思考和讨论以及培养临床思维等方面尚存在一定差距。因此需对病案设计的层次性、趣味性和挑战性方面进行进一步提高,规范病案设计,持续进行质量监控。

摘要：“以学生为中心”的教学理念凸显了学生在教学过程中的主体地位，弥补了传统教学模式的不足。基于上述理念，本研究尝试在《生物化学》课程中开展有效的教学设计以进一步提升教学效果。首先要明确课程的“教学目标”（包括知识目标、能力目标及情感目标），分析教学中重要的“情境因素”（如学情分析、课程特点、班级情况等），从而选择适合的“教学策略”（如启发策略、探究策略、问题策略等）、“教学方法”（讨论法、案例教学法、问题探究法等）及“评价方式”（如终结性评价兼顾形成性评价）以组织课堂教学。教学结束后要及时进行“反馈与教学反思”，将教学延伸至课外。结果表明，有效的课堂教学设计，更容易激发学生的学习热情，促进学生深度学习，取得较好的教学效果。

摘要：目的鉴定微血管内皮细胞上是否表达生成硫化氢(H2S)的酶,为深入研究硫化氢的心血管作用提供新线索。方法原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞(CMEC),设计相应引物后用RT-PCR的方法检测胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因转录情况,进一步用兔抗大鼠CSE和CBS多克隆抗体对CMEC进行蛋白水平的免疫荧光染色。此外对另两种微血管内皮细胞株RF/6A和bEnd.3也检测了H2S生成酶的表达。结果三种微血管内皮细胞都扩增出CSE基因的特异条带,而CBS基因都未扩增出相应产物。CMEC的免疫荧光染色显示CSE抗体染色为阳性,CBS抗体染色为阴性。结论首次发现了微血管内皮细胞上存在CSE的表达,提示内皮细胞可以通过生成硫化氢调节心血管活动。

摘要：在单细胞水平研究肝组织内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是十分重要的,但相关研究技术尚处于推进阶段,不能满足临床需要。基于微滴数字聚合酶链反应技术(digital droplet polymerase chain reaction,ddPCR),本研究建立了一套单细胞水平绝对定量HBV DNA和RNA的单细胞微滴数字PCR方法(single-cell ddPCR,sc-ddPCR)。通过混合不同比例的HBV阳性和阴性细胞来模拟HBV慢性感染状态下的肝脏,分析此方法检测HBV DNA的线性和检测下限。以cccDNA来源RNA(episome-derived RNA,eRNA)为例,进一步设计针对eRNA的sc-ddPCR检测方案。利用不同来源转录本在结构上的差异,设计针对eRNA的特异性引物探针体系,在HBV肝癌细胞系中验证此引物和探针体系的特异度,并利用梯度稀释的HBV细胞株分析此方法检测eRNA的线性和检测下限。结果显示,本研究建立了基于ddPCR的DNA和RNA的单细胞水平检测方法,该方法表现出良好的线性(HBV DNA:R^(2)=0.9987;eRNA:R^(2)=0.9425),梯度稀释的HBV细胞株均能准确检测出阳性信号,具有高灵敏度(检测下限:HBV DNA为0.16%,eRNA为0.2%)。本研究建立的sc-ddPCR方法可针对多种DNA和RNA进行检测,为进一步研究肝组织内HBV病毒学活动提供了良好的技术支撑,可以更深入地分析肝组织内HBV的病毒学特征,从而有利于HBV治疗策略的优化和研发,具有广阔的应用前景。

摘要：核酸疫苗已成为现代传染病疫苗中的研究热点,然而,核酸疫苗的临床转化仍然面临着转染效率低下和生物相容性不佳等瓶颈,迫切需要研发安全、高效的核酸递送载体。本研究提出一种新的核酸递送策略,在聚(β-氨基酯)[poly(β-amino ester),PBAE]和核酸自组装形成PBAE纳米颗粒(PBAE nanoparticles,PBAE-NPs)的基础上,进一步采用聚谷氨酸[poly(glutamic acid),PGA]进行修饰,形成PGA修饰的PBAE纳米颗粒(PGA modified PBAE nanoparticles,PPs)。本文将通过结构表征和生物学评价探究PPs作为核酸递送载体的性能。体外表征结果显示,PPs具有粒径小、Zeta电位低和血清稳定性强等良好的生物学特性。细胞溶酶体逃逸实验结果表明,PGA修饰能够提高PPs的溶酶体逃逸能力。流式细胞术结果表明,相较于PBAE-NPs,PPs显著增强了核酸转染效率。此外,CCK-8实验结果显示,PPs具有良好的生物安全性。综上所述,PPs具有安全性好、核酸转染效率高等特点,是一种具有开发前景的核酸递送载体,为今后核酸疫苗载体的设计提供了新的思路。

摘要：疫苗一直被视为终结人类免疫缺陷病毒1型和2型(human immunodeficiency virus type 1/2,HIV-1/2)最有力的武器。位于HIV-1gp41胞外域C末端的近膜端外部区域(membrane-proximal external region,MPER)是一个重要的抗原位点,但糖蛋白41(glycoprotein 41,gp41)在野生型HIV-1的包膜蛋白中并未充分暴露,单独的gp41或MPER多肽无法模拟gp120/gp41包膜蛋白在病毒包膜上的天然状态。本研究以HIV-1gp41MPER为抗原进行疫苗设计,以期能诱导产生具有强效中和作用的MPER特异性抗体。通过在gp41的N末端七肽重复域(N-terminal heptad repeat,NHR)和C末端七肽重复域(C-terminal heptad repeat,CHR)引入突变,阻断二者相互作用形成6螺旋(6-helix bundle,6-HB)构象;使用不同来源的流感病毒HA1亚基替代gp120,以防止机体产生大量针对HA1的抗体,并构建一系列包含不同HA1亚基的HA/gp41-1605嵌合DNA。结果发现,在细胞上表达的嵌合疫苗抗原能更好地展示MPER上的中和表位,但不显示gp41上免疫优势抗原表位。使用构建的HA/gp41嵌合DNA疫苗对新西兰大耳兔进行肌肉内序贯免疫,提示该疫苗策略的确不可诱生高滴度的HA抗体或gp41的loop及6-HB特异性抗体,而能诱生MPER特异性抗体。然而,该抗体对HIV-1不具有中和作用,说明该疫苗策略还有待进一步优化。

摘要：GEC-ESTRO APBI是一项探索加速部分乳房照射(APBI)应用于早期乳腺癌保乳术后辅助放疗中的Ⅲ期临床研究,旨在对比多导管插植近距离照射技术的APBI与体外全乳照射(WBI)的疗效和副反应差异。研究设计上,采用国际多中心、非盲、随机对照、非劣效设计。主要研究终点为同侧乳腺局部复发率,次要研究终点为不良反应发生率、美容效果、10年无病生存率和10年总生存率等。研究共纳入1 328例早期乳腺癌患者,随机分配至外照射WBI组或多导管插植近距离照射APBI组,两组中位随访时间分别为10.3年和10.18年,符合分析条件的患者数分别为551例和633例。WBI组的10年局部复发率为1.58%(95%CI:0.37%~2.80%),而APBI组为3.51%(95%CI:1.99%~5.03%),两组局部复发差异率为1.93%(95%CI:-0.018%~3.870%,P=0.074)。7.5年和/或10年随访数据表明,两组不良事件大多为1~2级,3级副反应发生率方面,APBI组优于WBI组(1%vs 4%,P=0.021)。结果表明,多导管插植近距离照射技术APBI与外照射WBI相比,疗效类似且晚期副反应较少,可作为早期乳腺癌患者保乳术后辅助放疗的新选择。尽管该研究的10年随访结果进一步确认了APBI在早期乳腺癌保乳术后辅助放疗中的应用价值,但在非劣效研究设计的解读和临床实践中的推广应用等方面仍值得进一步讨论和思考。