摘要：在单细胞水平研究肝组织内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是十分重要的,但相关研究技术尚处于推进阶段,不能满足临床需要。基于微滴数字聚合酶链反应技术(digital droplet polymerase chain reaction,ddPCR),本研究建立了一套单细胞水平绝对定量HBV DNA和RNA的单细胞微滴数字PCR方法(single-cell ddPCR,sc-ddPCR)。通过混合不同比例的HBV阳性和阴性细胞来模拟HBV慢性感染状态下的肝脏,分析此方法检测HBV DNA的线性和检测下限。以cccDNA来源RNA(episome-derived RNA,eRNA)为例,进一步设计针对eRNA的sc-ddPCR检测方案。利用不同来源转录本在结构上的差异,设计针对eRNA的特异性引物探针体系,在HBV肝癌细胞系中验证此引物和探针体系的特异度,并利用梯度稀释的HBV细胞株分析此方法检测eRNA的线性和检测下限。结果显示,本研究建立了基于ddPCR的DNA和RNA的单细胞水平检测方法,该方法表现出良好的线性(HBV DNA:R^(2)=0.9987;eRNA:R^(2)=0.9425),梯度稀释的HBV细胞株均能准确检测出阳性信号,具有高灵敏度(检测下限:HBV DNA为0.16%,eRNA为0.2%)。本研究建立的sc-ddPCR方法可针对多种DNA和RNA进行检测,为进一步研究肝组织内HBV病毒学活动提供了良好的技术支撑,可以更深入地分析肝组织内HBV的病毒学特征,从而有利于HBV治疗策略的优化和研发,具有广阔的应用前景。

摘要：目的本文以MERS-CoV、H1N1和HIV-13种病毒Ⅰ型包膜蛋白中跨膜亚基的NHR区域为靶标,设计能够与靶标特异性结合并对3种病毒均发挥抑制活性的完全非天然广谱抗病毒多肽。方法对非天然多肽IIS序列优化改造并经Fmoc固相合成法获得目标肽,开展3种病毒的抑制活性测试,通过圆二色谱、分析型超离心和等温滴定量热实验研究目标肽与靶标的作用机制。结果目标肽对MERS-CoV、H1N1和HIV-13种病毒均具有抑制活性,能够与3种病毒的NHR区域作用阻止病毒的膜融合过程。结论本文建立以病毒膜融合过程为基础的非天然抗病毒多肽设计方法和评价思路,为广谱抗病毒药物的开发提供一种新兴且有效的研究路径。

摘要：组织定居B细胞是一类只存在于非淋巴组织中的记忆B细胞,它的表型特征使其适应非淋巴组织环境并可长期存在。当机体遇到相同抗原二次侵袭时,组织定居B细胞迅速作出反应,控制病原体扩散并清除病原体,发挥了机体免疫防御的作用。本文对组织定居B细胞的免疫学特征研究进展作一综述,为今后相关的作用机制和免疫功能的研究提供参考,并为疫苗设计提供理论基础。

摘要：目的:探讨当归散的不同化学组分对低子宫容受性小鼠受孕率的影响差异,筛选改善控制性超促排卵(COH)所致受孕率降低的最佳化学组分配方。方法:采用溶剂法对当归散中化学组分进行系统分离,分离出4个不同极性化学成分群,即石油醚提取物(组分A)、乙酸乙酯提取物(组分B)、乙醇提取物(组分C)和水提取物(组分D),并采用正交设计法配制出化学组分配方。采用"曲普瑞林+尿促性素(HMG)+绒促性素(HCG)"长周期超促排卵法制备小鼠低子宫容受性模型,造模同时预防性给予各化学组分配方,共9d。排卵当日合笼,于孕8d剖取子宫,清点胚泡。结果:当归散中组分A、B、D对受孕率具显著性影响,组分B、D使用可提高小鼠受孕率,而组分A则使受孕率降低。结论:当归散可以改善促排卵引起的子宫容受性降低,其中BCD化学组分配方为最优配方。

摘要：目的鉴定微血管内皮细胞上是否表达生成硫化氢(H2S)的酶,为深入研究硫化氢的心血管作用提供新线索。方法原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞(CMEC),设计相应引物后用RT-PCR的方法检测胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因转录情况,进一步用兔抗大鼠CSE和CBS多克隆抗体对CMEC进行蛋白水平的免疫荧光染色。此外对另两种微血管内皮细胞株RF/6A和bEnd.3也检测了H2S生成酶的表达。结果三种微血管内皮细胞都扩增出CSE基因的特异条带,而CBS基因都未扩增出相应产物。CMEC的免疫荧光染色显示CSE抗体染色为阳性,CBS抗体染色为阴性。结论首次发现了微血管内皮细胞上存在CSE的表达,提示内皮细胞可以通过生成硫化氢调节心血管活动。

摘要：为适应时代和专业任务的需求,改善传统的法医毒物学关键信息获取方式,设计、建立法医毒物学数据库及信息平台系统十分重要。利用基于Web的B/S结构建立结构合理的信息系统,收集、整合、收录518种毒物的鉴定相关关键信息,并提供基础检索、中毒症状检索和质谱图检索三种检索途径。所建系统结构合理,内容丰富,检索方式多样,能较好满足毒物鉴定实践需求。

摘要：目的设计与开发“白血病患儿父母支持系统”医护端APP并进行可用性评价。方法于2022年3-4月对白血病患儿父母、医护人员进行访谈,了解患儿父母希望通过医护端APP实现的交互需求,以及医护人员对于医护端APP的功能需求,据此确定医护端APP功能模块,与软件开发人员合作开发医护端APP。并于2022年6-8月对APP进行形成性可用性评价和总结性可用性评价。结果构建了“白血病患儿父母支持系统”医护端APP,包括线上问答、患儿健康档案、宣教推送、个人中心4大模块,实现了医患问答互动功能、患儿健康档案浏览和搜索功能、健康信息同步功能、健康信息更新提醒功能、知识推荐功能、医护人员资格认证功能、医患互动交流数据统计功能。可用性评价结果显示医护端APP可用性良好。结论“白血病患儿父母支持系统”医护端APP符合患儿父母支持需求且适于医护人员使用,具有良好的可用性。

摘要：疫苗一直被视为终结人类免疫缺陷病毒1型和2型(human immunodeficiency virus type 1/2,HIV-1/2)最有力的武器。位于HIV-1gp41胞外域C末端的近膜端外部区域(membrane-proximal external region,MPER)是一个重要的抗原位点,但糖蛋白41(glycoprotein 41,gp41)在野生型HIV-1的包膜蛋白中并未充分暴露,单独的gp41或MPER多肽无法模拟gp120/gp41包膜蛋白在病毒包膜上的天然状态。本研究以HIV-1gp41MPER为抗原进行疫苗设计,以期能诱导产生具有强效中和作用的MPER特异性抗体。通过在gp41的N末端七肽重复域(N-terminal heptad repeat,NHR)和C末端七肽重复域(C-terminal heptad repeat,CHR)引入突变,阻断二者相互作用形成6螺旋(6-helix bundle,6-HB)构象;使用不同来源的流感病毒HA1亚基替代gp120,以防止机体产生大量针对HA1的抗体,并构建一系列包含不同HA1亚基的HA/gp41-1605嵌合DNA。结果发现,在细胞上表达的嵌合疫苗抗原能更好地展示MPER上的中和表位,但不显示gp41上免疫优势抗原表位。使用构建的HA/gp41嵌合DNA疫苗对新西兰大耳兔进行肌肉内序贯免疫,提示该疫苗策略的确不可诱生高滴度的HA抗体或gp41的loop及6-HB特异性抗体,而能诱生MPER特异性抗体。然而,该抗体对HIV-1不具有中和作用,说明该疫苗策略还有待进一步优化。

摘要：目的研究成骨相关转录因子(OSX)沉默对醛固酮诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响。方法体外原代培养小鼠的VSMC。针对小鼠OSX基因设计合成小分子干扰RNA(siRNA)序列,使用Lipo 2000为载体,转染体外培养的VSMC;FAM荧光标记siRNA优化转染条件。实时PCR检测OSX mRNA表达。将siRNA序列转染VSMC,细胞分为4组:1正常组;2醛固酮组(1.5 mmol/L);3siRNA转染组:醛固酮+OSX-siRNA;4阴性转染对照组:醛固酮+阴性对照siRNA。实时RT-PCR及免疫印迹法检测OSX、整联结合涎蛋白(Ibsp)基因和蛋白表达;茜素红染色观察细胞钙盐沉积。结果与醛固酮组相比,siRNA转染组OSX mRNA表达在转染后24 h及48 h均明显低于醛固酮组(均P<0.01);OSX蛋白表达在转染后48 h和72 h均低于醛固酮组(均P<0.01),以48 h最明显。siRNA有效沉默OSX基因表达后,OSX转染组Ibsp mRNA和蛋白的表达低于醛固酮组(均P<0.01),而且细胞钙盐沉积低于高磷组。结论 OSX-siRNA可以有效抑制VSMC OSX基因和蛋白的表达,从而抑制醛固酮诱导的VSMC成骨样分化和细胞钙化。OSX可以成为CKD血管钙化治疗的靶点。

摘要：目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因rs1801133位点多态性与肺癌发生风险的相关性。方法采用病例-对照研究设计,纳入上海市及江苏省泰州地区肺癌患者974例和健康对照1 005例作为研究对象,采集研究对象外周血液后提取全血基因组DNA进行MTHFR基因rs1801133位点基因分型,用非条件logistic回归分析评估该位点单核苷酸多态性与肺癌发生风险的相关性。结果总人群中MTHFR基因rs1801133位点CT基因型与TT基因型个体肺癌的发生风险均低于CC基因型个体[比值比(OR)=0.801,95%置信区间(CI):0.651~0.985,P=0.035;OR=0.754,95%CI:0.582~0.975,P=0.032],但经年龄、性别、吸烟状况和恶性肿瘤家族史校正后差异无统计学意义(校正后OR=0.841,95%CI:0.677~1.045,P=0.118;OR=0.799,95%CI:0.609~1.047,P=0.104)。校正后分层分析结果显示,在显性模型中CT+TT基因型男性和恶性肿瘤家族史阳性者肺癌发生风险均较CC基因型对应人群降低(OR=0.764,95%CI:0.597~0.977,P=0.032;OR=0.600,95%CI:0.385~0.925,P=0.022),CT+TT基因型人群发生肺鳞状细胞癌的风险较CC基因型人群降低(OR=0.727,95%CI:0.542~0.976,P=0.033)。结论 MTHFR基因rs1801133位点C>T突变降低了男性和恶性肿瘤家族史阳性者肺癌的发生风险,尤其是鳞状细胞癌的患病风险。