摘要：目的:针对人类肝脏蛋白质组计划中大规模基因克隆及构建肝脏蛋白相互作用图谱的研究需要,改造酵母双杂交载体pPC86和pDBleu,并构建中国人肝组织cDNA文库,为肝脏蛋白质组计划的研究奠定基础。方法:设计并合成特定寡核苷酸序列,经过处理形成具有黏性末端的双链DNA片段,插入到pPC86、pDBLeu载体相应的酶切位点处,从而获得改造的新载体。利用改造后的载体、中国人正常肝组织mRNA和Clontech公司SMART文库构建试剂盒构建NpDBLeu-cDNA文库。结果:酶切鉴定和DNA测序证实改造后载体插入位点和序列正确,成功获得新载体NpPC86和NpDBLeu。滴度测试表明,所构建NpDBLeu肝组织cDNA文库容量为1.93×106cfu,转化子重组效率为95.2%,扩增文库达到109cfu·mL-1。结论:利用SMART技术成功构建了中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库。

摘要：从水稻愈伤组织抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)文库中分离出一个PCD相关基因的EST片段 ,根据水稻基因组的序列设计引物 ,从汕优 6 3中分离与克隆出rPDCD5的全长cDNA。rPDCD5包含387bp的可译框 ,编码由 12 8个氨基酸构成的蛋白质。序列比对分析显示 ,该检测的蛋白质与已知PDCD5的高度同源。半定量实时PCR分析证实了该基因在环境因子 (低温处理和NaCl处理 )

摘要：本研究设计了CP1和CP10两种嵌合肽免疫原,它们由人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β- hCG)3个线性B细胞表位(BCE)以及包括来自乙肝表面抗原和破伤风类毒素2个广谱性T细胞表位(TCE)的6个TCEs组合而成。编码CP1及其衍生物CP10的人工基因分别重组插入热诱导pBV221载体后,均能在大肠杆菌中以约占细菌总蛋白1％的比例被表达。在蛋白印迹试验中,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上显示约为16．5 kD分子量的CP1和CP10表达蛋白,能被抗各插入表位单克隆或多克隆抗体识别。各表达蛋白可用制备性PAGE方法一步纯化,纯化产物均显示95％以上的电泳均一性,纯化得率可达到每升培养液1-2mg水平。以它们为抗原主动免疫小鼠,都能分别产生识别CP1或CP10和天然β-hCG的抗血清,并都能在它们的抗血清中检测到各插入抗原表位的抗体。hCG CPs的可获得性及其能诱导各表位抗体生成特征,有可能成为研制hCG抗生育和肿瘤治疗性疫苗的新的候选免疫原。

摘要：目的　获得尽可能多的华支睾吸虫UNIGENE及全长基因 ,建立成虫基因表达谱 ,为华支睾吸虫发育过程中基因表达的规律和功能基因组学研究奠定基础。方法　构建 pBluescriptⅡSK全长cDNA质粒文库 ,先对 5’端进行随机EST大量测序 ,生物信息分析后归并UNIGENE ,并对归并的结果进行了 3’端的序列测定 ,根据 3’端测序结果 ,再次进行UNI GENE归并 ,对能够拼接上的克隆进行了序列拼接。对预测为完整基因且未测通的序列 ,进行了引物设计 ,walking反应测序 ,将得到的UNIGENE用点样法制备基因芯片。结果　获得 5’端有效EST序列 4 0 6 6个 ,测序结果UNIGENE分析 ,归并获得1775个UNIGENE ,5’端预测的全长基因为 377个。共获得测通的cDNA序列 2 77个 ,其中全长基因 198个。目前制备的华支睾成虫基因表达谱芯片含有 1775个基因。结论　所构建的华支睾吸虫成虫全长cDNA文库质量较好 ,采用的技术路线获取全长基因建立基因表达谱的效率较高。

摘要：目的建立CHAP抗生酶数据库,对已知的CHAP抗生酶信息进行收集整理,为研究其功能机制,和设计研发新型CHAP抗生酶提供帮助。方法收集公共数据库和科学文献中的CHAP抗生酶信息,使用UniProtKB,InterPro,PDB,GO和BioPerl进行信息关联和信息注释;使用Apache,MySQL,PHP,Perl和jQuery构建数据库及WEB页面。结果构建了基于WAMP架构的CHAP抗生酶数据库(http://***/database/chap),包含来自于263种来源的1572种CHAP抗生酶,WEB界面提供浏览、搜索和统计信息等功能,允许用户以自定义的搜索标准快速获取数据,并对CHAP抗生酶的序列、结构、来源、功能、物化性质等信息进行分析。结论本研究建立的CHAP抗生酶数据库作为抗生酶研究的一个独特工具,具有多种潜在的应用,为进行CHAP抗生酶研究的研究者提供了一个极有用的研究平台。

摘要：目的　选择 PF4和 TSP1的高活性片段设计融合基因— TSF,在大肠肝菌表达 ,细胞水平上检测表达产物的生物学活性。方法　 PF4的 C—末端 13肽和 TSP1的 4 2 9～ 4 5 9片断 31肽通过 Gly-Pro- Gly肽桥设计为融合蛋白— TSF。采用 p GEX- 2 T载体在 *** JM10 9中表达 TSF蛋白。采用 MTT方法测定 TSF及其相关物 GST- TSF、PF4 (5 8- 70 )、TSP1(42 9～ 4 5 9)等对血管内皮细胞、平滑肌细胞、QGY772 1人肝癌细胞、HL F人肺成纤维细胞等生长的抑制效应。结果　合成的 TSF融合基因 ,克隆到p GEX- 2 T载体 ,转化 *** JM10 9,获得了 TSF蛋白的高效表达。建立了 TSF蛋白的纯化复性方法 ,获得了 GST- TSF融合蛋白及 TSF蛋白。TSF、GST- TSF、PF4 (5 8～ 70 )和 TSP1(42 9～ 4 5 9)均特异抑制血管内皮细胞的生长 ,其中 TSF的活性最强 ,活性大小次序为 TSF>GST- TSF>PF4 (5 8～ 70 ) >TSP1(42 9～ 4 5 9)。结论　融合表达蛋白— TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长。

摘要：借助计算机软件分析 ,设计出能特异性切割HPV11型 644ntE2mRNA的核酶。遵循Symons锤头状核酶结构和GUX剪切位点原则 ,靶序列存在 3 2个剪切位点 ,通过计算机软件分析核酶的最佳剪切位点 ,并对底物及核酶的二级结构进行预测及进行相应基因生物学功能和基因同源性分析 ,筛选出 2个锤头结构核酶。针对这两位点设计的核酶分别命名为RZ2 777和RZ3 2 81。计算机分析显示 ,两核酶与底物切点两翼碱基形成锤头状结构 ,切点所在基因序列具有相对松弛的二级结构 ,位于该基因重要生物功能区内 ,是核酶的理想攻击区域 ,通过基因库检索 ,在已知人类基因中排除了与上述两核酶切点两翼碱基有基因同源性序列的可能性。并非所有的GUX位点 (X :C、U、A)或CUX均可作为核酶的最佳剪切位点 ,计算机分析可帮助尽快选择出最适核酶 ,指导进行核酶体外转录载体构建并进行切割反应 ,为下一步将核酶用于细胞内和体内试验打下基础。

摘要：目的 :并行、对比研究广西高、低发病区原发性肝癌p5 3基因突变热点。方法 :参照国际公共p5 3突变数据库资料发生频率最高的 7个突变类型作为检测探针设计寡核苷酸芯片 ,应用该种寡核苷酸芯片技术检测肝癌抑癌基因p5 3上对应的 7个常见突变位点的突变频率及突变类型。结果 :检测高发区组及低发区组肝癌石蜡包埋标本各 14例 ,p5 3突变发生率分别为 6 4 3%及 14 3% ,P <0 0 5。高发区组p5 3突变热点为 2 4 9编码区 ,占该组突变的 77 8% ,突变形式为 2 4 9ser突变。结论 :广西高发区肝癌p5 3基因突变热点为 2 4 9ser突变 ,低发地区肝癌p5 3基因突变点呈散发性 ;应用寡核苷酸芯片技术可并行、高效。

摘要：利用筛选到的 2 5个特异引物对蝴蝶兰不同花色品种作RAPD分析 ,确定了 12个品种间的遗传距离 ;并根据Neighbor joining遗传距离矩阵构建系统聚类文件 ,将该 12个品种分为两个家族 :第一家族中包含基色为白色的花色品种 ,花蕊颜色略有不同 ;第二家族为具有条纹的花色品种。品种间遗传距离最大为 0 .783 2 ,最小为 0 .10 3 4。