摘要：化学法合成的α－降钙素基因相关肽基因从pXZ101表达质粒转移到pUC18质粒中测序鉴定后，克隆到pGEX表达载体上，在大肠杆菌C600中表达．融合蛋白经谷胱甘肽亲和层析初步纯化，用凝血酶切去融合蛋白，经SephadexG－50柱纯化后，用溴化氰裂解，再经SephadexG－25柱纯化后得到纯品CGRP．经ELISA反应及放射免疫鉴定具有生物活性；经末端氨基酸测定与设计的一致．动物活体实验证明，大肠杆菌中表达的蛋白有降压活性．

摘要：目的　HRalGDS基因是我们新近分离与克隆的人类新的Ras相关基因,是鼠Ral鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)在人类的同源基因。利用辐射杂种板(radiationhybrid,RH)制图法进行该基因的精细定位。方法　根据HRalGDS基因cDNA的3′不翻译区设计正反向引物,PCR扩增人鼠辐射体细胞杂种板(radiationhybridGenebridge4panel),并将杂种板每一细胞株的PCR结果按一定方式统计后输入WIMITRadiationHybridMapper的相关网址,进行HRalGDS基因的RH制图和整合分析。结果RH制图将HRalGDS基因定位在9号染色体的骨架图上。定位附近的Marker顺序为9pter——WI6083——HRalGDSWI1405——9qter,经文献检索及进一步与物理图、遗传连锁图及细胞学图谱的整合分析,将其精细定位于染色体9q34.1区带的基因位标SURF5与RPL7A之间。结论　HRalGDS基因的定位不仅有助于人染色体9q34区带的精细基因图与细胞遗传图的构建,而且也表明用RH制图法定位于人类新基因既简便、易行、可靠,又可为丰富染色体上的基因定位提供新的信息。

摘要：应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因簇中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断．该方法稳定、可靠，可望用于临床诊断．

摘要：淋巴毒素（Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ，ＬＴ）是由活化的Ｔ淋巴细胞分泌的一种糖蛋白，凝胶迟滞电泳分析发现，ＴＮＦ－α诱导３０ｍｉｎ的Ｊｕｒｋａｔ细胞核抽提物与ＬＴ基因５＇上游片段可形成多种ＤＮＡ－蛋白质复合物．ＤＮａｓｅⅠ足迹法实验发现，ＬＴ基因５＇端上游－１０６～－８３ｂＰ（共２４ｂＰ）序列具有蛋口保护足迹：此２４ｂｐ的序列中存在一个ｋＢ样结合位点：－１００～－９０ｂＰ（５＇－ＧＧＧＧＧＣＴＴＣＣＣ－３＇）．以此蛋白保护足迹区序列而设计合成的寡核苷酸探针进行的凝胶迟滞电泳分析及竞争反应表明，ＮＦ－ｋＢ类蛋白因子参与了此序列的ＤＮＡ－蛋白质的特异性结合，提示ＴＮＦ－α可能通过激活ＮＦ－ｋＢ类蛋白质因子参与ＬＴ基因的表达调控．

摘要：介绍了一种确定基因外显子一内含子交界点的快速、准确的方法，应用该方法对本室克隆的一个新的锌指基因ZNF191进行了外显子划界。将含有ZNF191全长CDNA的基因组DNA经限制酶酶切后与退火的Bubblelinker连接，以该连接产物为模板，用依据cDNA序列设计的引物和Bubblelinker上的特异引物进行PCR扩增，继以相同的扩增条件对扩增产物进行测序，从而确定了外显子－内含子的交界点。结果确认出ZNF191基因由4个外显子和3个内含子组成，这一结论为后来完成的ZNF191基因的全长测序结果所证实。

摘要：为了探讨人肝组织中C2 H2 型锌指蛋白基因的分布数目以及克隆新的锌指蛋白基因 ,设计了简并PCR引物 ,扩增基因组DNA ,以其中的 2个扩增片段为探针筛选人肝cDNA文库 ,获得了近百个阳性克隆 .对其中的 2 0个cDNA片段进行了末端测序和同源检索 ,证明 1 5个为新的锌指基因片段 .对其中的 4个cDNA片段进行了组织表达谱分析 ,Northern杂交显示 :L5 5为肝、胰脏高度表达 ;其余为广谱表达 .利用FISH将其中的 2个片段L2_9和L5_5分别定位于 1 9q1 3.3和 1 8q1 2 .1 .

摘要：传统的DNA重组方法 TypeⅡ型限制酶技术受到片段纯化的限制,无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题,本研究将耐热连接酶链式反应(Thermostable ligase chain reaction,TLCR)引入DNA片段的连接与捕获。该技术利用耐热型DNA连接酶的特性,在热循环反应中配合针对目的片段末端序列设计的单链寡核苷酸连接模板——Helper,实现目的片段的特异性连接和产物数量的指数性增长。两个质粒构建实验被用于验证TLCR技术的可行性和应用效果。首先利用TLCR技术从一个未经纯化的含有7种不同大小片段的混杂体系中特异性地将一段1.5 kb的片段捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验准确率达到80%,验证TLCR技术在复杂混合体系中特异性连接DNA片段的可行性和准确性。在另一个质粒构建实验中,TLCR技术从λ噬菌体基因组Hind消化物中将两段总长达27 kb的片段按顺序捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验同样达到了80%的准确率。结果表明,TLCR技术能够简化DNA重组实验的操作,并且适用于多片段和大片段的连接,可以为生物学研究提供便利。

摘要：LYZL4是本实验室克隆的一种c型人溶菌酶基因,根据毕赤酵母密码子偏爱性对LYZL4基因进行优化设计,优化后的基因克隆至具有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的pPIC9K载体中。通过电转化方法整合到甲醇营养型毕赤酵母表达菌株GS115基因组上,再利用不同浓度梯度的G418抗性YPD固体培养基筛选高拷贝转化子,经摇瓶发酵后,其上清液在SDS-PAGE胶上14.4 kDa处出现明显的蛋白条带,该蛋白条带经质谱鉴定证实是人LYZL4蛋白。以人溶菌酶(164 071U/mg)作为标准品,使用艳红微球菌作为底物,通过比色法测定重组LYZL4溶菌酶蛋白的活性,结果显示重组人溶菌酶LYZL4蛋白具有明显的溶菌活性,其酶活力可达38893U/ml。

摘要：利用国际生物信息资源，通过计算机检索寻找与已知功能基因具有高度同源的ＥＳＴｓ，据此设计特异的ＰＣＲ扩增引物，并通过单侧特异引物搭配ｃＤＮＡ分子库载体引物（锚定引物），在低严紧条件下扩增各种组织的ｃＤＮＡ分子库以富集目标片段。继以单向锚定ＰＣＲ扩增产物为模板，用双侧特异引物再次扩增，获得的特异扩增ＰＣＲ产物经测序证实之后，将其用作探针杂交筛选相应的ｃＤＮＡ文库并进而克隆目的基因的全长ｃＤ－ＮＡ。此方法用于三个人类新基因的全长ｃＤＮＡ的分离与克隆，结果全部获得成功。这三个人类新基因分别是Ｈ－ＲａｌＧＤＳ基因、Ｈ－ＣＩＳ基因和Ｈ－Ｓ６ＰＫ基因，它们在ＧｅｎＢａｎｋ数据库的登录号分别是：ＡＦ０２７１６９、ＡＦ０３５９４６及ＡＦ０３７４４７。本文结果提示这一方法对于应用现有的人类基因组生物信息资源，克隆具有重要生物学功能的人类新基因，尤其是克隆呈低丰度的基因转录本全长序列具有较高的实用价值。

摘要：氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。