摘要：目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 针对葡萄球菌的mec A耐药标志性基因和SA特有的fem A基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较。结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致。结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测。

摘要：目的构建mecA、nuc、内标基因3种基因联合检测的单管多通道Taqman探针荧光定量PCR法,用于鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),并与传统细菌培养和鉴定方法进行比较,评估其临床应用价值。方法以169例临床标本和经常规细菌培养和VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定的金黄色葡萄球菌(SA)156株[其中MRSA 106株、甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)50株]作为研究对象;用Primer premier 5.0和Beacon Designer 7.0软件进行PCR引物和Taqman探针设计,探针5′端分别标记FAM、Cy5和VIC,3′端标记MGB,用荧光定量PCR仪进行检测。169例临床标本同时也做了常规细菌培养和鉴定。结果169例临床标本中,常规方法鉴定出MRSA 48例,检出率为28.40%;多重荧光定量PCR检测鉴定出MRSA 53例,检出率31.36%。2种方法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。156例SA的检测中,使用常规方法鉴定出MRSA 106例、MSSA 50例,MRSA检出率为67.95%;多重荧光定量PCR检测法鉴定出MRSA 108例、MSSA 48例,MRSA检出率为69.23%;两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论多重荧光定量PCR检测法提高了MRSA的检出率,减少了漏检风险,检测时间较常规方法明显缩短,可用于临床MRSA的快速鉴定。