摘要：目的用乳酸菌质粒表达载体pNZ2103克隆BALB/c小鼠金属硫蛋白(MT)-1 cDNA基因。方法设计一对含有限制酶Pst1和H indⅢ位点的引物。以质粒pET21 a-MT为模板,采用PCR法扩增BALB/c小鼠MT-1cDNA。用限制性内切酶Pst1和H indⅢ将MT-1 cDNA克隆于质粒pNZ2103形成重组质粒pNZ2103-MT。将pN2103-MT转化进入大肠埃希菌DH5α。采用PCR法和Pst1、H indⅢ双酶切方法鉴定含有pNZ2103-MT的转化子。12%SDS-PAGE鉴定pNZ2103-MT在大肠埃希菌DH5α的表达水平。结果获得含有pNZ2103-MT的DH5α转化子。结论以乳酸菌质粒表达载体pNZ2103构建的pNZ2103-MT在大肠埃希菌中表达水平较低,采用SDS-PAGE难以检测到表达水平的金属硫蛋白。

摘要：实验是教学过程中非常重要的一部分,实验过程不仅是学生对理论知识进行深入体会、理解、消化的过程,也是学生自己动手、主动思考的过程.因此作者认为生化实验教学不能仅以验证理论知识和掌握基本操作技能、培养学生动手能力为目的,还应致力于自信心、创新能力、科研能力、合作精神等综合素质的培养,即在教学中培养学生对实验进行设计、实验现象进行分析、综合、比较,作出合理判断和正确推理的能力,如此才能在实验教学中提高学生综合素质,优化高校人才的培养模式.在此方面作者作了一些尝试.

摘要：目的:平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用。为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,本实验利用分子生物学技术构建了肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体,并纯化出重组的MLCK表达的蛋白质,为深入研究MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制提供了实验基础。方法:利用野生型MLCK全长的cDNA序列设计CaM结合位点的突变引物,利用PCR技术进行定点突变,获得CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK)。在大肠杆菌中表达重组CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK),通过亲和层析及凝胶过滤进行分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE检测表达及纯化的重组蛋白。结果:构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK),△CaM/MLCK在大肠杆菌中以可溶形式大量表达并得到纯化。结论:成功构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK)并获得纯化的表达蛋白质。

摘要：目的:构建重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)N端删除载体,为研究平滑肌MLCK的分子机制提供研究模型。方法:以重组质粒pCold/155为模板,根据其待删除序列(N端1-41个氨基酸)设计上下游引物,行PCR扩增。将扩增片段以Nde I/EcoR I双酶切,产物行琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因。将目的基因与载体连接,转化至大肠杆菌。筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:用Nde I和EcoR I双酶切重组质粒pCold/155,琼脂糖凝胶电泳显示得到约4.4kb载体和约3.4kb的MLCK片段。阳性克隆经测序证实MLCK的N端41个氨基酸序列已被成功删除。结论:成功构建了重组MLCK N端删除载体pCold/155/D41。

摘要：生物化学及分子生物学是医学的重要基础课,并且现已成为一门前沿学科,其理论及技术已经辐射渗透到基础医学及临床医学的各个学科,给诊断和治疗带来了革命性的变革,同时也为医学科学的发展提供了新的概念、思路、技术和方法,因此受重视程度不断提高.然而,由于生化课的内容抽象、繁杂、深奥、枯燥,并需要有较好的有机化学知识基础,因而成了学生普遍公认的重点课和难点课.要做好生化课的教学,就需要不断地探索教学方法,提高生化课的教学质量,才能满足学生需要并使其获得最大的收获.以下是我们总结多年教学实践的几点体会.