摘要：背景：既往的动物实验已多次证实了肝复康对肝纤维化组织具有预防及治疗作用。目的：观察中药肝复康不同浓度含药血清对肝星状细胞T6细胞株Ⅰ、Ⅲ型胶原、a-平滑肌肌动蛋白和金属蛋白酶组织抑制因子1基因表达的影响，以及探讨其抗纤维化的作用及分子机制。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-07／2006—07在大连医科大学病理生理学教研室完成。材料：清洁级SD大鼠25只，体质量300～350g，用于制备含药血清；鼠肝星状细胞T6细胞株由上海中医药大学肝病研究所徐列明教授惠赠；中药肝复康由柴胡、当归（补血合血）、黄芪（益气）、赤芍、白芍（活血化瘀）、丹参（活血化瘀）等组成。方法：按肝复康高、中、低剂量（8．32，4．16，2．08mL／只）灌胃制备药物血清。实验分为5组，空白对照组：加含体积分数0．1正常对照血清的DMEM；模型对照组：加含体积分数0．1正常对照血清＋60ug／L血小板衍生生长因子的DMEM；肝复康低、中、高剂量组：分别加含体积分数0．1低、中、高剂量药物血清＋60ug／L血小板衍生生长因子的DMEM；各组均培养24h。主要观察指标：反转录-聚合酶链反应检测不同浓度肝复康药物血清干预后Ⅰ、Ⅲ型胶原、a-平滑肌肌动蛋白和金属蛋白酶组织抑制因子1mRNA的表达。结果：空白对照组肝星状细胞T6细胞各指标表达呈相对低水平，而模型对照组表达明显升高（P〈0．01）；肝复康各剂量组则均具有能明显抑制这种升高的作用（P〈0．01），其中以中剂量组干预效果最为明显。结论：中药肝复康对肝纤维化具有明显的抑制作用，其作用机制可能是通过抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、a-平滑肌肌动蛋白及金属蛋白酶组织抑制因子1mRNA的转录，从而减少细胞外基质的形成，以达到抗纤维化的作用。

摘要：介绍应用siRNA表达框架对原代培养的细胞进行RNA干扰。RNA干扰是由双链RNA介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,它已经广泛应用到基因功能研究、基因表达调控机制和抗病毒感染等热门领域,在哺乳动物的原代细胞中进行RNA干扰的研究为功能基因研究提供了重要意义。siRNA表达框架与脂质体的转染率直接影响RNA干扰的效果,本文介绍了如何设计和构建siRNA表达框架,筛选最佳的靶位点。

摘要：目的旨在弄清ＮＳ３参与分子间相互作用的确切区段，为研究针对ＮＳ３的抗ＨＣＶ寡肽小分子药物的设计提供依据。方法参照ＨＣＶ中国河北株序列设计ＮＳ３引物，将其Ｎ末端的前１５个和前３０个氨基酸分别缺失掉。然后用酵母双杂交系统检测ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用强度在缺失前后的变化，从而判明ＮＳ３Ｎ末端氨基酸在分子间相互作用中的意义。核苷酸序列分析采用ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ３７３Ａ型自动测序仪。结果ＮＳ３Ｎ末端氨基酸缺失前后，ＮＳ３／ＮＳ３分子间及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用的强度相差有显著性（Ｐ＜０．０１），但缺失１５个氨基酸和缺失３０个氨基酸对上述相互作用强度的影响差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＮＳ３Ｎ末端的１～３０个氨基酸在ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用中有一定意义，其Ｎ末端前１５个氨基酸（ＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧ）对于分子间相互作用更为关键。本研究结果将为抗ＮＳ３丝氨酸蛋白酶活性的寡肽抑制物的研究打下基础。