摘要：目的:构建组成型表达重组人C-反应蛋白(Recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母工程菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法:将设计合成的rhCRP基因克隆到表达载体pGAPZαA上并转化至毕赤酵母X-33中进行组成型分泌表达,通过His亲和层析柱纯化rhCRP。分别采用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法检测目的蛋白并鉴定其免疫反应性。结果:重组表达载体pGAPZαA/rhCRP经酶切及DNA测序鉴定构建成功。重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达23kDa的rhCRP,27h即达到最大表达水平,表达量约3mg/L。经一步分离纯化获得纯度为96.58%的rhCRP,经间接ELISA检测表明其具有免疫反应性。结论:成功构建了组成型分泌表达rhCRP的毕赤酵母菌株,为进一步自主研发人CRP检测试剂奠定了基础。

摘要：目的获取蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)表面变异抗原基因的部分核苷酸序列,并对其进行序列分析。方法根据贾第虫VSP已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增VSP基因的部分核苷酸序列,将PCR产物纯化后连接到pMD19-TSimple Vector,转化至感受态细胞JM109,扩增目的片段。扩增的片段测序后进行生物信息学分析。结果成功克隆了编码贾第虫VSP的一分子质量为1486bp的基因片段。该片段富含半胱氨酸(12.8%),且含有26个-CXXC-模体,所得序列与GenBank中Gillin(1990)公布的TSA417基因序列同源性为99%。结论我国人源贾第虫北京株(BEIJ88/BTMR1/1)中表面变异抗原部分基因已测序完成。

摘要：目的:构建针对容量调控氯通道基因(CLC3)的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLC3基因的干扰作用.方法:设计CLC3靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPER载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体转染法转染胃癌细胞SGC7901,通过RT PCR、间接免疫荧光检测CLC3基因表达水平的变化.结果:把针对CLC3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确,稳定转染人胃癌细胞SGC7901后,RT PCR、间接免疫荧光检测表明,CLC3基因的表达水平明显降低.结论:构建了针对CLC3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CLC3基因表达.