摘要：研究表明脂肪组织是多潜能干细胞的又一新来源,脂肪组织来源的干细胞可被用于细胞治疗及组织工程。然而,传统的培养方法很难满足临床需求。为获得大量的脂肪干细胞以满足临床需求,现将脂肪干细胞接种到胶原/壳聚糖支架上,比较细胞在静态环境和在转瓶中动态扩增的情况。通过CCK-8检测细胞增殖情况;并分析葡萄糖和乳酸的代谢情况;14d后扫描电镜观察细胞在支架内的生长情况;流式细胞仪检测干细胞相关表面标记表达;RT-PCR检测干细胞相关转录因子的表达;并检测扩增后的干细胞的多向分化潜能。结果表明:在动态微环境中扩增14d后,与静态条件下相比,支架内的细胞具有更强的增殖活性和更好的多向分化潜能。所扩增的细胞能够保持原有干细胞的特性。结论:所设计的支架-转瓶培养系统是一个简便有效的扩增脂肪干细胞的方法。

摘要：在优化组织工程骨低温保存程序时,需要了解体外培养的种子细胞成骨细胞的渗透特性。尤其对于高浓度的玻璃化保护剂,更有必要设计合适的保护剂导入、洗脱方案来减小高浓度保护剂的渗透效应损伤及其化学毒性作用。利用显微镜图像分析法研究了用于构建组织工程骨的种子细胞——成骨细胞的渗透特性,其中包括细胞的等渗体积、细胞在高渗及低渗溶液中的平衡体积和细胞的非渗透体积以及细胞膜对水和冷冻保护剂的渗透系数,并比较了悬浮和贴壁的成骨细胞对渗透压的耐受范围。结果表明,在等渗条件下(289 mmol·kg-1),成骨细胞的平均体积为2585.22μm3;细胞体积随溶液渗透压的变化规律符合理想渗透压变化曲线,即Boyle van’t Hoff关系式,由该关系式得到成骨细胞的渗透体积为0.335 V0;室温下,在2 mol·L-1二甲基亚砜(DMSO)和1,2-丙二醇(PD)中成骨细胞膜对水的水力传导系数分别为1.5×10-13和5×10-13 m3.N-1·s-1,对保护剂的渗透系数分别为7.5×10-11和120×10-11mol·N-1·s-1;贴壁的成骨细胞对渗透压的耐受范围远低于悬浮细胞,说明了贴壁细胞与悬浮细胞渗透特性的差异。由以上参数结合相关数学模型能够设计和研究冷冻保护剂的导入、洗脱方案,以使组织工程骨的低温保存获得更好的效果。

摘要：设计了一种细胞间距可调的trans well共培养方法，以研究脐带血来源的造血干／祖细胞（HS／PCs）和人脂肪干细胞（human-adipose derived stem cells，h-ADSCs）体外共培养时细胞间作用距离对造血干细胞扩增能力和脂肪干细胞在共培养后干细胞特性的影响。采用不同规格的砂纸打磨孔板的上壁面，经高精度游标卡尺测量，使两种细胞之间的有效接触间距为10--450μm不等。然后以h-ADSCs为基质细胞，分别考察HS／PCs和h-ADSCs在不同的作用距离下的共培养情况。其间每24小时对细胞进行计数，观察细胞形态。培养7天后对MNCs表面抗原CD34＋、CFU-GM集落扩增倍数进行了检测；同时也对***表面抗原（CD13、CD29、CD34、CD44、CIM5、CD73、CD105、CD166、HLA-DR）及其多向分化潜能（成骨、成软骨、成脂肪）进行分析以鉴定其干细胞性能。结果表明，通过transwell共培养，细胞之间在作用距离为350gm时HS／PCs的扩增效果最好，其中造血MNCs扩增了15．1±0．2倍，CD34＋扩增了5．0±0．1倍：扩增的h-ADSCs表达CD29、CD44、CD166，而不表达CD34、CD45，且在适当诱导条件下可以向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化。

摘要：背景:近年来组织工程种子细胞结合微胶囊技术在细胞治疗、基因治疗和药物控制释放等方面的应用越来越广泛,检测成骨细胞的耗氧量和耗氧速率,可为成骨细胞在不同培养模式中的体外培养、扩增和工程化骨组织的三维构建以及以上方面的实验提供相关的理论依据。目的:实验拟对比成骨细胞在体外静态直接培养和包囊培养两种不同方式中的耗氧量和耗氧速率。设计、时间及地点:对比观察,于2007-03/09在大连理工大学精细化工国家重点实验室干细胞与组织工程研发中心完成。材料:出生二三天SD大鼠10只,SPF级,雌雄不拘;海藻酸钠溶液购自天津远航化学品有限公司。方法:无菌条件下取大鼠颅骨,剔净后剪成1mm×1mm碎组织块,经2.5g/L胰蛋白酶溶液和1g/LⅡ型胶原酶溶液分别消化后,加入含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养基,调节细胞浓度为109L-1后接种在T-25培养瓶内。取二三代细胞分别接种于培养瓶中直接静态培养和经海藻酸钙微胶囊包囊后培养。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察成骨细胞在静态培养瓶中和包囊培养过程中的黏附、伸展、分布情况,并测定细胞生长曲线。检测成骨细胞的生物学性能及不同体外培养方式中成骨细胞消耗氧的速率。结果:①原代培养的成骨细胞为贴壁生长,形态多为梭形或多边形。经包囊培养后成骨细胞在海藻酸钙微胶珠中呈圆形,细胞分布均匀。②体外培养的成骨细胞各种生物学性能良好。③体外静态培养瓶与包囊培养效果良好,耗氧速率分别为5.56×10-6μmol/min和1.25×10-7μmol/min。结论:体外静态直接培养的耗氧量和耗氧速率高于包囊培养法,体外静态培养与包囊培养的成骨细胞各种生物学性能都良好,适于作为组织工程的种子细胞进行下一步的实验。

摘要：背景：骨髓间充质干细胞在体外易分离和扩增，还易于外源基因的转入及表达，在人类医学上被认为是一种理想的治疗性细胞和基因治疗中的靶细胞。目的：探讨脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染兔骨髓间充质干细胞及其基因的表达。设计：单一样本观察。单位：大连市干细胞与组织工程研发中心，大连医科大学基础医学院生化室。材料：实验于2006—03／2007—06在大连市干细胞与组织工程研发中心及大连医科大学基础医学院生化室完成。新西兰大白耳兔，5月龄，雌雄不拘，体质量2．0～2．5kg。方法：以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板，用PCR方法获得目的基因片段，定向克隆至载体pMD19-T，限制性内切酶消化鉴定、基因测序后，构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒。同时对兔骨髓间充质干细胞取材、培养、鉴定。真核表达质粒经酶切鉴定后，采用Lipofectamine2000介导法转染经过鉴定的兔骨髓间充质干细胞。并于转染后24h在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。主要观察指标：表达载体的构建及基因转染骨髓间充质干细胞鉴定。结果：实验克隆出胞嘧啶脱氨酶基因，并将其与带荧光的真核表达载体pIRES2-AcGFP1连接。经转染兔骨髓间充质干细胞24h后，在倒置荧光显微镜488am蓝光激发下观察，pIRES2-AcGFP1-CD组和pIRES2-AcGFP1空载体组均可见细胞发出绿色荧光，未经转染的细胞未见发出绿色荧光，说明胞嘧啶脱氨酶基因成功转染了骨髓间充质干细胞。结论：骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。