摘要：提高牛血清白蛋白(C-BSA)的等电点,能诱发原位免疫复合物型的肾炎,机制已有证实。C-BSA通过注射进入动物体内可以种植于肾小球的基底膜(GBM),并且与带阴性电荷的GBM发生沉积反应而诱发肾炎。本实验设计并优化了稳定阳离子化牛血清白蛋白的合成方法,并初步验证了应用该产物建立原位复合物型肾炎模型。[第一段]

摘要：目的:探讨高糖状态下金葡菌对THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β的影响。方法:体外培养THP-1细胞,采用2×2析因分析实验设计,以高糖、细菌2个因素,每个因素2个水平交叉分为对照组、高糖组、细菌组和高糖细菌组。各组提取细胞总RNA,应用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法,检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素(IL)-1β的表达情况。结果:高糖和细菌及两者交互效应均影响THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β。高糖组与对照组比较细胞表达iNOS和IL-1β均减弱(P<0.01);高糖细菌组表达iNOS和IL-1β均显著低于细菌组(P<0.01)。细菌组与对照组比较iNOS和IL-1β表达均增加;高糖细菌组与高糖组比较IL-1β表达增加,iNOS表达变化不显著。结论:高糖状态下,单核细胞受到细菌感染时表达iNOS和IL-1β功能减弱,提示糖尿病患者抗感染能力降低与高血糖有关。

摘要：目的采用RNA干扰(RNAi)技术封闭乳腺癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因,观察封闭效果及癌细胞的体外侵袭能力的变化及转移相关基因的变化。方法设计3段siRNA,分别构建pSilencer封闭载体,转染高表达CXCR4基因的乳腺癌细胞系T47D,通过流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法分别从蛋白水平和转录水平检测CXCR4表达率的改变;采用Matri- gel对转染后乳腺癌细胞体外侵袭能力的变化进行检测,应用定量PCR分析其他转移相关基因的变化。结果3组转染CXCR4-siRNA细胞定量PCR检测CXCR4抑制率分别为95.67%、85.94%、98.25%。流式细胞仪检测CXCR4表达率分别为4.95%、11.10%、5.53%,与转染Control-siRNA细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。3组封闭细胞的侵袭指数分别为0.037、0.290和0.188。封闭细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达有增加趋势,胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)表达有下降的趋势。结论CXCR4在乳腺癌转移中具有重要作用,mRNA具有强大的基因敲除能力,为肿瘤转移的基因治疗奠定实验基础。

摘要：目的 构建S6K1 shRNA基因重组腺病毒（S6K1Ax）并在细胞及小鼠肝脏验证对S6K1基因的沉默效果.方法 设计3种S6K1 shRNA序列,通过在pcPUR质粒与pcDNA3.1质粒、cosmid质粒之间的拼接将S6K1 shRNA转染进腺病毒,筛选沉默效果最佳的S6K1Ax并在293细胞扩增纯化得到高效价的S6K1Ax.感染来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪细胞系,在Western blot水平评价其对S6K1蛋白表达的抑制效果.将S6K1Ax注射进C57BL/6J小鼠尾静脉,6 d后处死小鼠取肝脏,逆转录-聚合酶链反应和Western blot观察小鼠肝脏S6K1在mRNA和蛋白水平的表达.检测注射S6K1Ax前后小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）变化.结果 Western blot证实制备的S6K1 Ax可抑制来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪3种细胞系和小鼠C57BL/6J肝脏S6K1的蛋白表达.小鼠肝脏S6K1 mRNA结果显示：对照组为1.39±0.21,实验组为0.63±0.09,t=6.132,P〈0.01,差异有统计学意义.S6K1Ax注射小鼠,ALT水平注射前为（15.15±4.43）U/L,注射后为（17.32±4.22）U/L,t=1.451,P〉0.05,差异没有统计学意义.结论 构建的S6K1Ax可将来源于小鼠的细胞系及C57BL/6J小鼠肝脏S6K1基因沉默,为研究S6K1的基因功能提供了适合的实验工具.

摘要：背景:类风湿性关节炎作为一种自身免疫病其免疫学发病机制目前尚未完全明确。T淋巴细胞、尤其是CD4+TH1/TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展中可能有重要作用。目的:探讨主要参与细胞免疫的CD4+TH1细胞和辅助体液免疫应答的TH2细胞在类风湿性关节炎发生发展过程中的作用。设计:病例-对照,对比观察。单位:武警医学院免疫学教研室。对象:选择1999-03/2000-03在天津医科大学总医院内科就诊的类风湿性关节炎患者15例为患者组,男2例,女13例,其中12例受检者类风湿因子阳性,3例为阴性。同期选取健康体检者或本单位工作人员健康者30人为对照组,男4人,女26人。纳入对象均对实验目的知情同意。方法:①采用酶联免疫斑点法对两组对象的外周血单个核细胞中CD3+T细胞(总T细胞)、CD4+T细胞和CD8+T细胞进行检测,普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出阳性细胞的百分率。②采用酶联免疫斑点法检测活化的分泌细胞因子的TH细胞;细胞内有红色斑点的细胞为阳性细胞,分泌γ-干扰素的细胞为TH1细胞,分泌白细胞介素4的细胞为TH2细胞;普通光学显微镜油镜下计数200～500个淋巴细胞,计算出TH1细胞、TH2细胞的百分率及TH1/TH2细胞的比值。③采用t检验或χ2检验比较数据间差异性。主要观察指标:两组对象外周血T淋巴细胞亚群(包括CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞)及CD4+TH1/TH2细胞定量分析结果。结果:类风湿性关节炎患者15例和健康者30人均进入结果分析。①两组外周血的总T细胞(即CD3+T细胞)、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率差异不明显(P>0.05)。②患者组外周血的TH1细胞的百分率明显高于对照组犤(24.44±5.25)%,(14.93±3.82)%,P0.05)。结论:TH1细胞介导的细胞免疫可能与类风湿性关节炎的发生发展有关。

摘要：目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定。将构建好的p100shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒。运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用Westernblot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果。结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株。慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90%以上细胞发出绿色荧光,Westernblot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系。

摘要：针对免疫学学科知识结构的特点,结合现代教学手段,精心设计并实施阶段性自主学习模式。教学实践证明自主性学习模式不仅能提高学生的学习热情,激发学习兴趣。而且,有利于学生综合素质和创新能力的培养,并能突出以人为本,强调个性发展的教学理念,促进整体教学质量的提高。

摘要：目的　研究小干扰RNA(siRNA)抑制耐药乳腺癌细胞系MDR1基因表达的可行性。方法　选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体 ,然后转化质粒到大肠杆菌中 ,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF7/ADR细胞中 ,10 0mg/L潮霉素筛选 2周 ,用流式细胞术从蛋白水平检测P gp的表达率 ,及作实时定量聚合酶链式反应从基因转录水平检测MDR1基因的表达率。结果　流式细胞术检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后P gp的表达率由99.8%下降到 12 .3 % ;作为阳性对照的转染过GFP基因的LA795细胞的GFP蛋白表达率由 74.8%下降到 10 .6%。实时相对定量PCR检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由 2 5 .2 2增加到 3 0 .64。结论　siRNA能抑制人乳腺癌多耐药细胞系MCF7/ADR内MDR1基因表达 ,从而为逆转肿瘤细胞的耐药性提供了一种新的方法。

摘要：目的:设计和构建趋化因子受体4(CXCR4)基因的小干扰RNA质粒,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法:选择高表达CXCR4受体的人乳腺癌细胞系T47D作为研究对象。将预先设计的3段siRNA分别连入质粒载体,然后转化大肠杆菌,经过克隆、扩增、纯化后转染到T47D细胞中,G418筛选稳定表达细胞株,采用流式细胞术从蛋白水平检测CXCR4的表达率,实时定量PCR从基因转录水平检测CXCR4基因的表达率。结果:流式细胞术检测结果显示,T47D细胞经特异性siRNA作用后CXCR4的表达率由69.00%分别下降到4.95%、11.30%、5.53%。实时相对定量PCR检测结果显示,siRNA作用的细胞其CXCR4基因转录的抑制率分别为95.67%、85.94%、98.25%。结论:siRNA能够引发人乳腺癌细胞系T47D的CXCR4基因沉默,为进一步探讨CXCR4基因在乳腺癌转移中的作用奠定前期实验基础,也为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。

摘要：背景:细胞移植治疗心肌梗死为重建受损心肌带来希望,但移植后的细胞分化以及细胞移植能否长期持久地改善心脏功能等问题均不明确。目的:观察骨髓单个核细胞经冠状动脉移植入犬梗死心肌后,在心肌组织的分布、分化情况以及对心功能的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-03在泰达国际心血管病医院完成。材料:成年杂种犬16只,随机分为细胞移植组10只、模型对照组6只。方法:细胞移植组于髂前上嵴或髂后上棘穿刺抽取骨髓,经Ficoll密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞,行CM-DiI标记。两组犬均结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,于心肌梗死后2h,细胞移植组向心肌梗死区注射骨髓单个核细胞悬液1mL(3×107～1×108个细胞),模型对照组注射等量生理盐水。主要观察指标:血流动力学指标及超声心动图指标的变化,免疫荧光染色观察骨髓单个核细胞在心脏的迁移、分布及分化结果:与模型对照组比较,细胞移植后6周细胞移植组血流动力学指标左室舒张末压显著降低(P<0.01),心排出量明显升高(P<0.05);超声心动图指标左室收缩末容积、左室舒张末容积均得到显著改善(P<0.01),射血分数、每搏输出量亦明显改善(P<0.05)。自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后,可分布于心肌梗死区及梗死周边区,并表达肌球蛋白重链、连接蛋白43。结论:自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后可分化为心肌样细胞,改善急性心肌梗死后的心功能。