摘要：目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×10^3～1×10^4）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。

摘要：目的:建立基于微流控细胞芯片技术分析CD14+单核细胞髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的方法,初步探讨急性粒-单核细胞白血病(M4)患者CD14+单核细胞的MPO表达。方法:以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为基质材料,二次模塑成型工艺制备微流控细胞芯片。选取临床诊断M4患者48例,骨髓象大致正常患者52例作为对照组。设定微流控芯片检测单核细胞MPO方法,测定细胞MPO阳性率和程度。应用微流控细胞芯片法分析M4患者和对照组CD14+单核细胞的MPO表达。结果:设计微流控单细胞分析芯片,粒细胞能够进入相应微流控通道,可分离血细胞,但是白细胞周围存在影形细胞现象,而细胞形态未见有明显改变。M4患者骨髓细胞CD14+单核细胞MPO阳性率和活性明显高于对照组(P<0.05)。结论:应用微流控单细胞技术分析CD14+单核细胞MPO表达,结果显示M4患者CD14+单核细胞MPO活性明显高于对照组,有可能作为辅助检查标志物。

摘要：目的观察微量元素变化与铁、碘缺乏大鼠甲状腺功能变化之间的关系。方法健康SPF/VAF级初断乳SD大鼠32只,雌雄各半,按体重随机分为碘铁联合缺乏组(IFD)、碘缺乏组(ID)、铁缺乏组(FD)和对照组(N),每组各8只。通过饲料控制4周使各组大鼠铁、碘营养水平达到实验预期。测定尿碘浓度、甲状腺重量、血红蛋白、血清甲状腺激素和促甲状腺激素水平,测量血清中镁(Mg)、钙(Ca)、铬(Cr)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)和硒(Se)的含量。结果大鼠碘营养和铁营养各项指标均符合试验设计要求。与对照组相比,铁缺乏组、碘缺乏组、碘铁联合缺乏组均出现甲状腺功能减退(甲减)或甲减趋势;碘铁联合缺乏组大鼠血清Ca、Mn、Zn浓度增加(P<0.05,P<0.01),其他元素变化无统计学意义;碘缺乏组大鼠血清Cu、Zn、Se浓度增加(均P<0.05),其他元素变化无统计学意义;铁缺乏组大鼠血清Ca、Zn浓度增加(P<0.05,P<0.01),其他元素变化无统计学意义。结论多种微量元素的变化可能协同铁、碘对甲状腺的功能产生影响。

摘要：目的:设计微流控芯片,单细胞分析慢性粒细胞白血病患者粒细胞表达髓过氧化物酶(MPO)活性。方法:收集慢性粒细胞白血病患者和对照组各60例,联苯胺-H2O2法对血细胞进行MPO染色。应用自行设计的微流控芯片单细胞分析粒细胞表达MPO。结果:联苯胺染色法发现粒细胞中表达MPO,且各阶段染色程度不同,MPO呈现颗粒状分布。芯片分析的结果与联苯胺染色法所呈现的结果在形态特征方面一致,试验组和对照组成熟粒细胞MPO活性均高于幼稚粒细胞,平均MPO活性试验组明显高于对照组。结论:毛细管芯片单细胞分析粒细胞MPO活性,发现慢性粒细胞白血病患者粒细胞平均MPO显著增高,有可能作为慢性粒细胞白血病诊断标志和个体化检查指标。

摘要：目的克隆获得腰果主要过敏原Ana o 3基因,并利用pCold-SUMO原核表达载体重组表达Ana o 3并鉴定免疫活性。方法提取腰果总RNA,逆转录至c DNA,设计特异性引物,通过巢式PCR技术克隆腰果Ana o 3基因,将其插入pCold-SUMO vector,鉴定并测序;将测序正确的阳性质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),低温15℃诱导表达。摸索诱导表达条件,经镍柱纯化,并通过Western blot鉴定免疫活性。结果测序结果表明,克隆腰果Ana o 3基因片段全长为417 bp,与GenBank上Ana o 3基因CDS序列基本一致;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,目的蛋白分子量为27 kD左右,大小与理论值相符;Western blot结果表明,与腰果过敏阳性血清具有良好的反应性。结论从腰果中成功克隆了Ana o 3基因,并于原核系统表达了Ana o 3蛋白,证实了此蛋白与腰果过敏血清具有良好的反应性。

摘要：目的:建立一种能同时检测婴幼儿腹泻粪便中常见病毒的多重荧光定量PCR技术。方法:根据GenBank上几种病毒基因组保守序列设计引物序列,建立多重荧光定量PCR方法,对所建立的多重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性及重复性进行验证;并以所建立的方法对150例婴幼儿病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果:所建立的多重荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性,灵敏性检测可达102拷贝/mL,检测不同病毒核酸浓度各自的检测Ct值标准差均较小,变异系数均低于1.0%,具有较好的重复性;检测150份粪便标本,多重荧光定量PCR的检出率为36%,胶体金方法检出率为38.67%,两者比较差别无统计学意义(χ2=6.91,P>0.05)。多重荧光定量PCR方法中轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒的检出率分别为12.67%、6.00%、13.33%和4.00%,测序结果与已知病毒株基因都具有高度同源性。结论:所建立的多重荧光定量PCR方法快速、特异、灵敏,可以作为临床病原诊断的一个重要工具且适用于流行病学调查研究。

摘要：为构建一种高表达高亲和力IgE受体α链(high affinity IgE receptor alpha chain, FcεR1α)和共表达新型标志物神经肽Y(neuropeptide Y, NPY)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的RBL-2H3细胞模型并鉴定其活性,设计FcεR1α-NPY-EGFP序列,构建表达载体pLV-Puro-FcεR1α-T2A-NPY-EGFP-TYK2,对其进行测序鉴定后无内毒素大量提取;经脂质体Lipo2000瞬时转染,于48 h后通过荧光定量PCR、Western blotting、FACS鉴定FcεR1α表达水平;通过传统β-氨基己糖苷酶介质释放试验检测受体的活性,通过NPY-EGFP释放试验检测新型指标的功能。经基因水平、蛋白质水平、膜蛋白表达及功能试验鉴定FcεR1α位于RBL-2H3细胞膜上并有结合人特异性IgE(specific IgE, sIgE)的活性,新型标志物NPY-EGFP可以受刺激分泌。该研究成功构建了一种高表达FcεR1α和共表达新型标志物NPY-EGFP的细胞模型用于检测人血清sIgE。

摘要：目的:探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测6种常见呼吸道病原菌的检测方法。方法:采用BeaconDesigner7.9设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限。对176例临床标本中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行回顾性检测,并用一代基因测序验证。结果:MRT-PCR法检测病原菌的最低检出限达103 copies/mL,大肠埃希菌19例,金黄色葡萄球菌30例,铜绿假单胞菌37例,肺炎克雷伯菌53例,阴沟肠杆菌15例,鲍曼不动杆菌22例,与传统鉴定方法报告病原菌一致,特异性达100%。通过一代基因测序结果完全符合。结论:使用多荧光通道PCR仪,采用多重PCR技术检测痰液标本中6种常见病原菌的基因检测方法,敏感性和特异性高,提高了检测效率。

摘要：目的检验短棒状杆菌细胞壁提取物对膀胱癌细胞的抑制效果。方法将3组大鼠分别膀胱灌注短棒状杆菌细胞壁提取物、致癌剂MNU、0.9%氯化钠,灌注9周后提取每组的大鼠膀胱RNA,检测RNA的纯度与浓度。将提取的RNA反转录成cDNA,设计引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增大鼠干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(Grim19)、Stat3、β-actin基因。然后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,用Image J软件对电泳图进行分析。结果从短棒状杆菌提取物组、致癌剂甲基-亚硝基脲(MNU)组、0.9%氯化钠对照组的大鼠膀胱提取到的RNA浓度分别为53.3、93.4和64.9 ng/μl,OD260/OD280在2.03~2.07。琼脂糖电泳结果表明短棒状杆菌细胞壁提取物组的大鼠膀胱中Grim19基因、Stat3基因均高表达,致癌剂MUN组的大鼠膀胱Grim19基因的表达含量低,Stat3基因表达含量高。而0.9%氯化钠对照组Grim19基因、Stat3基因均正常表达。结论在患膀胱癌的大鼠体内,膀胱内灌注的短棒状杆菌细胞壁提取物可以有效地提高抑癌基因Grim19基因的表达,同时降低癌基因Stat3基因的表达,表明短棒状杆菌细胞壁提取物是一种潜在的抗膀胱癌药物。