摘要：目的:探究多肽金纳米粒P12经气道给药后在小鼠体内的生物安全性。方法:将125 nmol/L P12作为初始浓度,采用剂量递增法经小鼠气道给药,通过观察气道给予递增剂量的P12后小鼠1周内每日的临床症状和体质量变化,确认小鼠对P12的最大耐受剂量;经小鼠气道给予50μL治疗剂量(500 nmol/L)和大剂量(2μmol/L)P1224 h后,通过观察小鼠的血常规、血生化指标、脏器系数和组织病理学变化,进一步评价P12的急性毒性,以评估P12的体内安全性。结果:在给药后的1周内,给药量高达治疗剂量的4倍时小鼠的体质量下降也不大于15%,且临床症状表现正常。气道给予治疗剂量或大剂量P1224 h后,小鼠的脏器系数、血常规、血生化和主要脏器的组织病理学切片均表现正常。结论:经小鼠气道给予P12的最大耐受剂量远高于治疗剂量,P12具有较高的生物安全性。

摘要：目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。