摘要：目的　对致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的papA基因进行克隆和序列分析。方法根据F13型papA基因序列设计引物 ,并在二引物 5′端加上限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位点。采用此引物扩增 132菌株p菌毛粘附基因群的papA基因 ,扩增产物克隆入质粒 ,选取阳性重组质粒进行核苷酸序列分析。结果　UPEC132株经PCR法扩增获得约 70 0bp的papA片段 ,经克隆获得阳性重组质粒pCT2 0 ,对其进行序列分析显示papA编码 184个氨基酸多肽 ,与UPECJ96株papA相比较同源性达 98%以上 ,于 +4 3位和 +73位的错义突变对该菌毛的免疫学特性没有影响 ,保守的信号肽序列 16位出现同义突变 , 3位缺失三联体密码使 1, 3位切割三联体由ANN变为ANV。结论　pa pA信号肽序列变异可能影响其正确的切割 ,致使 132株 (Mr为 16 6× 10 3)和J96株 (Mr为 19 6× 10 3)p菌毛蛋白的相对分子质量不同。

摘要：端粒酶的激活与卵巢癌发生、进展有关。我们针对端粒酶hTERT设计合成反义脱氧寡核苷酸，对人卵巢癌细胞系进行反义基因治疗，观察其对卵巢癌细胞的生长抑制作用；同时，建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察反义hTERT对裸鼠移植鼠瘤生长的抑制作用。

摘要：目的　克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的粘附素基因papG并作序列分析。 方法　根据Ⅰ型papG(papGJ96 )和Ⅱ型 papG(papGIA2 )基因序列设计 3条引物 ,PG2和PG3分别为下游 3’端引物 ,PG1为两型papG上游 5’端共用引物 ,并在各引物 5’端加入限制性内切酶位点。以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增 ,将扩增产物克隆入质粒载体 ,筛选阳性重组质粒作序列分析。结果　UPEC132株以Ⅰ型 papG引物扩增时为阴性结果 ,以Ⅱ型 papG引物扩增时可获得约 110 0bp的DNA片段。扩增产物经克隆获得阳性重组质粒 pGC39和pGC10 3,对其序列分析显示 papG132编码337个氨基酸 ,与 papGJ96的同源性仅为 4 5 % ,而与 papGIA2的同源性为 98.6 %。与papGIA2比较 ,papG132核苷酸序列 +3位缺失 1个三联体密码 ,并在特异性受体结合域 +49位、+16 0位和PapD蛋白亚单位作用区 +2 72位、+314位存在错义突变 ,此外还存在 7处同义突变。结论UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPECJ96株 ,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合 ,后者为F13型 papA与Ⅰ型papG组合。Ⅱ型PapG粘附力较强 ,具有重要的临床意义。

摘要：目的：用PCR方法检测致肾盂肾炎大肠杆菌(UPEC)的papA基因，探索建立UPEC的鉴定方法。方法：根据已发表的F13型papA基因序列设计引物，采用PCR方法扩增700bp左右的papA基因，并与血凝试验相比较，用于不同血清型P菌毛菌株和尿源性大肠杆菌的检测。结果：7个血清型P菌毛粘附基因群的papA PCR扩增均出现阳性结果，阴性对照株均无非特异性反应。39株尿源性大肠杆菌中MRHA阳性菌株的检出率为74.4％，papA PCR扩增的阳性率为71.8％，两组结果无显著性差异(P＞0.05)。菌细胞悬液直接用于PCR检测的敏感性为3×105～3×106cfu/ml。结论：papAPCR方法用于UPEC菌株的鉴定有良好的应用前景。

摘要：实验教学是高等医学院校关键教学环节之一，培养学生不仅要具有宽广坚实的理论基础，还须具备较强的创新意识和实际动手能力。医学微生物学实验属形态学实验，以依附于课堂理论教学的验证性实验多，而利于学生创造性思维的研究设计性实验少；独立的单元型操作实验多，综合性实验少；陈旧经典型实验多。

摘要：目的　研究小干扰RNA(siRNA)抑制耐药乳腺癌细胞系MDR1基因表达的可行性。方法　选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体 ,然后转化质粒到大肠杆菌中 ,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF7/ADR细胞中 ,10 0mg/L潮霉素筛选 2周 ,用流式细胞术从蛋白水平检测P gp的表达率 ,及作实时定量聚合酶链式反应从基因转录水平检测MDR1基因的表达率。结果　流式细胞术检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后P gp的表达率由99.8%下降到 12 .3 % ;作为阳性对照的转染过GFP基因的LA795细胞的GFP蛋白表达率由 74.8%下降到 10 .6%。实时相对定量PCR检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由 2 5 .2 2增加到 3 0 .64。结论　siRNA能抑制人乳腺癌多耐药细胞系MCF7/ADR内MDR1基因表达 ,从而为逆转肿瘤细胞的耐药性提供了一种新的方法。

摘要：目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internalribosomeentrysite)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备。方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3’端与IRmES基因5’端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段。结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段。结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值。

摘要：为进一步提高 PCR诊断方法的特异性和敏感性 ,在单纯疱疹病毒 ( HSV) TK基因区设计了一对外层公用引物和两个内层分型引物 ,建立了半巢式 PCR检测和分型 HSV的方法。用该方法检测了天津地区 64例病毒性脑炎患者 (病脑组 )和 4 6例其他中枢神经系统疾病患者 (对照组 )的脑脊液 ( CSF)标本。病脑组了阳性率为 1 5.63% ( 1 0 / 64) ,其中 9例为 HSV-1感染 ,1例为 HSV-2感染。对照组阳性率为 2 .1 7% ( 1 / 46)。本方法在发病后第 1天即可测出 CSF中的 HSV DNA,敏感性为 0 .0 1 TCID50 。

摘要：目的:进一步提高PCR诊断方法的特异性和敏感性。方法:在单纯疱疹病毒(HSV)TK基因区设计了一对外层公用引物和两个内层分型引物,建立了半巢式PCR检测和分型HSV的方法。用该方法检测了天津地区64例病毒性脑炎患者(病脑组),和46例其他中枢神经系统疾病患者(对照组)的脑脊液(CSF)标本。结果:病脑组阳性率为15.63%(10/64),其中9例为HSV-1感染,1例为HSV-2感染。对照组阳性率为2.17%(1/46)。结论:本方法在发病后第1天即可测出CSF中的HSV DNA,敏感性为0.01TCID_(50)。

摘要：目的克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平。方法将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化。结果发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%。RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.5729±0.0241)相比,糖尿病对照组(DM)(0.1606±0.0075)和糖尿病补硒组(DM+Se)(0.3857±0.0194)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM+Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。