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利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株: 收藏
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引用; 《天津医科大学学报》2015年第6期21卷 480-483页; 作者：刘郁莹崔晓腾高星杰赵秀娟付雪葛林苏超杨洁天津医科大学生物化学系天津300070 天津医科大学基础医学研究中心天津300070 天津医科大学细胞生物学系天津300070 天津医科大学生物化学系，天津 300070 天津医科大学基础医学研究中心，天津 300070; 目的：利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除HeLa细胞中SND1基因，构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株。方法：设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sgRNA，以PX462质粒为载体，构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定...; 目的：利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除HeLa细胞中SND1基因，构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株。方法：设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sgRNA，以PX462质粒为载体，构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定后，将一对重组质粒共同转染进入HeLa细胞中，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，挑取单克隆细胞进行培养。最后用Western Blot鉴定敲除效果。结果：sgRNA正确插入到PX462质粒载体中，转染并筛选单克隆后的细胞中没有SND1蛋白的表达。结论：成功构建出HeLa细胞SND1基因敲除稳定株。; 来源：详细信息评论

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