摘要：背景:肿瘤干细胞假说认为肿瘤克隆性生长由肿瘤组织中一小部分具有干细胞特性的细胞维持。近年来几种实体瘤肿瘤干细胞陆续被分离出来,但至今未发现证实膀胱癌干细胞客观存在及其分离和鉴定有效方法的报道。目的:验证膀胱癌干细胞存在的可能性及EMA作为膀胱癌干细胞表面标志的可能性。设计:观察对比实验。单位:天津泌尿外科研究所,天津医科大学第二医院。材料:实验于2006-03/2007-07在国家"二一一"工程重点实验室天津市泌尿外科研究所肿瘤免疫室完成。9例膀胱组织标本来源于天津医科大学第二医院,符合低恶潜能膀胱乳头状泌尿上皮肿瘤及低分级乳头状泌尿上皮癌的诊断标准。另外40例用于免疫组织化学实验的低恶性膀胱移行上皮细胞癌及10例正常膀胱上皮均来自天津医科大学第二医院泌尿外科。留取标本前均签署知情同意书。方法:①通过DNA芯片技术比较正常泌尿上皮和膀胱癌基因表达的差异,以初步判断膀胱癌干细胞存在的可能性。②应用免疫组织化学方法检测干细胞相关基因Bmi-1和EZH2在低恶性膀胱移行上皮细胞癌组织中的表达情况。③观察27个潜在标志在正常和低恶性膀胱移行上皮细胞癌组织中的阳性定位情况。④通过免疫磁珠细胞分选系统获得EMA-亚群,分析其克隆形成、自我更新和增殖能力。主要观察指标:①正常泌尿上皮和膀胱癌基因表达的差异。②Bmi-1及EZH2蛋白在低度恶性膀胱移行上皮细胞癌与正常膀胱上皮中的表达差异。③克隆形成实验结果。结果:①发现了268个差异表达基因(包括Bmi-1和EZH2),Bmi-1和EZH2过表达于低度恶性膀胱移行上皮细胞癌。②除了EMA,其他26种可能的膀胱癌干细胞表面标志在分离膀胱癌干细胞方面没有应用价值。③EMA-位于正常泌尿上皮和膀胱癌癌组织的基底细胞层(可能的干细胞位置),EMA-亚群具有克隆形成、自我更新和增殖能力。结论:实验肯定了膀胱癌干细胞的存在,EMA-可能是它的表面标志物。

摘要：目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4（MAP4K4）对膀胱癌细胞株T24增殖、侵袭和凋亡的影响. 方法 采用基因芯片技术对2010年6月至201 1年6月5对肌层浸润性膀胱癌及癌旁组织的基因表达谱进行初步研究,对比癌和癌旁组织的差异基因表达,筛选与膀胱癌发生、发展相关基因.结合文献检索,筛选出 MAP4K4作为研究基因,并采用PCR和蛋白质印迹法从转录和翻译水平检测16对肌层浸润性膀胱癌及癌旁组织中MAP4K4的表达情况,验证基因芯片的结果.然后设计一个空载体质粒（对照组）及MAP4K4靶向短发夹RNA （shRNA）核苷酸序列质粒（靶向干扰组）分别转染T24细胞,嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,qRT-PCR和蛋白质印迹法检测靶基因干扰效率,并对转染后T24细胞进行MTT细胞增殖实验、Transwell细胞侵袭实验及Annexin-V法细胞凋亡检测. 结果 膀胱癌组织中MAP4K4表达高于癌旁组织（P=0.020）.MAP4K4基因沉默后细胞增殖减慢（靶向干扰组与对照组,P＜0.001）.靶向干扰组与对照组穿膜细胞分别为5.40±2.07和17.00±2.74（P=0.004）,细胞凋亡比例分别为（15.72±6.40）％和（4.23±3.29）％（P=0.023）,组间比较差异均有统计学意义. 结论 MAP4K4在膀胱癌中相对于正常组织高表达,降低MAP4K4基因表达可以抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭,促进细胞凋亡.MAP4K4有望成为膀胱癌治疗的新靶点.

摘要：设计一种新型的隔膜型人工膀胱并制定了相应的植入手术方法。植入１５只犬，观察１１天～６个月，进行了血与尿检测、Ｘ线检查、流体力学测试及尸检。结果表明，人工膀胱的贮尿器植入后能保持设计容量，流体力学性能良好；８５．０％以上受检肾无积水或仅有轻度积水，肾功能均正常；植入１个月后贮尿器尿液细菌学检查均为阳性，但肾盂尿阳性率仅８．３％。认为此型人工膀胱的植入为一种比较理想的尿流改道方法。

摘要：随着人类基因组研究计划(human genome project,HGP)DNA序列测定和分析研究工作的深入发展,单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)作为第三代遗传标记已经广泛应用于人群复杂性疾病易感性机制和个体化治疗方案的设计方面的研究。本文就与前列腺癌相关的遗传易感基因SNP进行了综述,主要阐述了细胞因子、受体以及相关酶类遗传多态性与前列腺癌发生之间的关系并分析其在前列腺癌治疗等方面的作用。

摘要：目的构建过表达及沉默细胞黏附分子1(CADM1)基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。1过表达CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为1、2、3组,real-time PCR扩增CADM1基因全长,与慢病毒载体p HBLV-IRES-Zs Green-PGK-puro进行连接(1组),并设载体对照组(2组)和空白对照(3组);经酶切及测序鉴定正确后在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。2沉默CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为A、B、C、D、E组,设计3条针对CADM1基因的干扰序列(siRNA1/2/3)分别与载体p HBLV-U6-shRNA-ZsGreen-Puro进行连接(A、B、C组),D组与p HBLV-U6-Zs Green-Puro进行连接,E组为空白对照;经双酶切、PCR及测序鉴定连接载体,在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。采用real-time PCR检测T24细胞中的CADM1 mRNA,Western blotting法检测CADM1蛋白。结果过表达和沉默CADM1基因的慢病毒载体及细胞株均正确构建。1、2、3组CADM1 mRNA相对表达量分别为4.84±0.02、1.12±0.03、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为4.53±0.03、1.05±0.04、1.00±0.01,1组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量高于2、3组(P均<0.05)。A、B、C、D、E组CADM1 mRNA相对表达量分别为0.28±0.05、0.98±0.02、0.74±0.01、0.99±0.01、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为0.33±0.04、0.86±0.12、0.67±0.07、1.00±0.04、1.00±0.03,A组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量低于B、C、D、E组(P均<0.05)。结论成功构建了过表达及沉默CADM1基因的膀胱癌细胞株T24。

摘要：目的分析天津地区不同职业男性不育症患者精液质量状况,为男性不育症的病因研究、预防干预及生殖健康服务工作提供依据。方法对178例男性不育症患者(不育组)和70例正常生育男性(正常组),按自行设计的调查表进行问卷调查,依据世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)标准,采用伟力精液质量检测系统,对不同职业接触者的精液质量进行检测和分析。结果不育组精液量、精子浓度和前向运动力(PR)值均低于正常组(P0.05)。精子浓度和PR值在驾驶员组、室内装修工人组、厨师组、石材从业亚组和正常组间分别比较,差异均有统计学意义(P0.05)。4个不同职业亚组的精子浓度、PR值分别低于正常组(P<0.01)。结论从事驾驶员、室内装修工、厨师和石材从业职业者易引起精液质量低下,从而导致男性不育。建议采取积极的职业防护,以降低职业有害因素对男性生殖健康的影响。

摘要：目的 :研究下调磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基2β(phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase,catalytic subunit type 2 beta,PIK 3C 2B)基因对前列腺癌PC-3细胞体外增殖及侵袭的影响,并探讨可能的作用机制。方法 :设计合成特异性针对PIK3C2B基因的2对si RNA(PIK3C2B-si RNA1和PIK3C2B-si RNA2)及阴性对照-si RNA(negative control-si RNA,NCsi RNA);采用瞬时转染法将各si RNA转入PC-3细胞;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测转入PIK3C2B-si RNA后对PC-3细胞中PIK3C2B m RNA及蛋白表达的影响;采用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测PIK3C2B基因沉默后对PC-3细胞增殖及侵袭的影响。蛋白质印迹法检测PIK3C2B基因沉默后对其下游蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)信号通路中Akt及磷酸化Akt蛋白表达的影响。结果 :PIK3C2B-si RNA转染PC-3细胞后,PIK3C2B m RNA及蛋白的表达水平均明显下调,以PIK3C2B-si RNA2的干扰效果较强(P<0.01);48和72 h时,PIK3C2B-si RNA2转染组PC-3细胞的增殖能力均明显低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05);PIK3C2B-si RNA2转染组PC-3细胞的侵袭能力明显低于阴性对照组及空白对照组(P值均<0.05)。PIK3C2B-si RNA2转染组PC-3细胞中总Akt蛋白的表达水平未发生变化,但磷酸化Akt蛋白的表达水平被明显下调(P<0.05)。结论 :PIK3C2B可能通过激活Akt信号转导通路促进PC-3细胞的体外增殖和侵袭能力。

摘要：目的 构建前列腺特异性双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43,为前列腺癌基因治疗实验研究奠定基础. 方法获取Cx43基因并克隆至pMD19-T Simple载体;合成HSV-TK基因并克隆到pIRES载体的MCS A中,得pIRES-TK;获取PSMAe/p并克隆至pIRES-TK中替换CMV启动子,得到pIRES-PSMAe/p-TK;将Cx43基因克隆到pIRES-PSMAe/p-TK的MCS B中,得到pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43,对此质粒双酶切鉴定并测序.pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43转染人前列腺癌细胞株LNcap,RT-PCR观察TK及Cx43基因表达. 结果合成的各质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳可见目的 基因条带;pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43经测序与预期设计相符.pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43转染LNCaP细胞,RT-PCR显示成功表达TK及Cx43 mRNA. 结论成功构建了含HSv-TK及Cx43的双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43.

摘要：目的探讨RNA干扰技术沉默羧基末端结合蛋白(CtBP)2基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖能力的影响。方法实验分为空白对照组、转染空质粒组、转染shRNA组。设计并合成针对CtBP2的3条特异性短发卡RNA(shRNA)模板,构建CtBP2-shRNA重组质粒,转染PC3细胞。通过RT-PCR检测CtBP2 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测CtBP2蛋白表达的水平,运用MTT法检测沉默CtBP2对PC3细胞体外增殖的抑制作用。结果将CtBP2-shRNA转染前列腺癌PC3细胞后,CtBP2 mRNA以及蛋白的表达水平均明显下降。沉默CtBP2表达后,MTT结果显示转染shRNA组的PC3细胞较空白对照组、转染空质粒组细胞增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CtBP2-shRNA可抑制CtBP2在前列腺癌细胞中的表达并抑制肿瘤细胞生长,提示CtBP2可作为前列腺癌基因治疗的一个新靶点。

摘要：目的探讨第5代阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(G5-PAMAM-D)作为小发卡RNA (shRNA)真核表达质粒的载体,进行前列腺癌RNA干扰基因治疗的可行性。方法根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)cDNA序列结构,分别设计构建表达EGFP mRNA、STAT3 mRNA的特异shRNA真核表达质粒pSilencing 4.1-EGFP-shRNA和pSilencing 4.1- STAT3-shRNA。在体外以G5-PAMAM-D为载体,将质粒pEGFP-C1和pSilencing 4.1-EGFP-shRNA共转染前列腺癌细胞PC-3、22Rvl,通过观察EGFP表达检测干扰效果以及转染效率;然后,以同样的方式将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA转入前列腺癌细胞系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞生长的抑制作用,丫啶橙染色观察细胞凋亡。制作前列腺癌小鼠模型,将G5-PAMAM-D与质粒pSilencing 4.1-STAT3-shRNA的混合物注射人荷瘤鼠肿瘤内,观察对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明,G5-PAMAM-D可将pSilencing ***-shRNA转入前列腺癌细胞,明显沉默EGFP的表达,并且G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA有效转入前列腺癌细胞中,明显抑制肿瘤细胞的生长,增加细胞的凋亡。体内实验证明,G5-PAMAM-D/pSilencing 4.1-STAT3-shRNA可抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长,而各对照组肿瘤生长无明显抑制。结论G5-PAMAM-D作为基因载体,可将shRNA的真核表达质粒在体内外转入前列腺癌组织细胞,并有效表达shRNA;G5-PAMAM-D可能成为应用前景广阔的小干扰RNA(siRNA)的载体。