摘要：目的:探讨流式细胞术(CD45/SSC设门法)检测恶性淋巴瘤骨髓受累的临床价值。方法:采用配对计数资料的实验设计,应用流式细胞仪对恶性淋巴瘤患者的骨髓标本进行检测,同时行骨髓涂片检查。结果:对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓同时行上述两种方法检测,流式细胞术阳性率67.65%(23/34),95%可信区间(51.92%,83.37%),涂片法阳性率11.76%(4/34),95%可信区间(0.94%,22.58%)。经配对计数资料χ2检验,差别有统计学意义。结论:流式细胞术是检测恶性淋巴瘤骨髓受累的有效方法,检出率67.65%,优于传统的涂片法。

摘要：目的采用RNA干扰(RNAi)技术封闭乳腺癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因,观察封闭效果及癌细胞的体外侵袭能力的变化及转移相关基因的变化。方法设计3段siRNA,分别构建pSilencer封闭载体,转染高表达CXCR4基因的乳腺癌细胞系T47D,通过流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法分别从蛋白水平和转录水平检测CXCR4表达率的改变;采用Matri- gel对转染后乳腺癌细胞体外侵袭能力的变化进行检测,应用定量PCR分析其他转移相关基因的变化。结果3组转染CXCR4-siRNA细胞定量PCR检测CXCR4抑制率分别为95.67%、85.94%、98.25%。流式细胞仪检测CXCR4表达率分别为4.95%、11.10%、5.53%,与转染Control-siRNA细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。3组封闭细胞的侵袭指数分别为0.037、0.290和0.188。封闭细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达有增加趋势,胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)表达有下降的趋势。结论CXCR4在乳腺癌转移中具有重要作用,mRNA具有强大的基因敲除能力,为肿瘤转移的基因治疗奠定实验基础。

摘要：目的:设计和构建趋化因子受体4(CXCR4)基因的小干扰RNA质粒,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法:选择高表达CXCR4受体的人乳腺癌细胞系T47D作为研究对象。将预先设计的3段siRNA分别连入质粒载体,然后转化大肠杆菌,经过克隆、扩增、纯化后转染到T47D细胞中,G418筛选稳定表达细胞株,采用流式细胞术从蛋白水平检测CXCR4的表达率,实时定量PCR从基因转录水平检测CXCR4基因的表达率。结果:流式细胞术检测结果显示,T47D细胞经特异性siRNA作用后CXCR4的表达率由69.00%分别下降到4.95%、11.30%、5.53%。实时相对定量PCR检测结果显示,siRNA作用的细胞其CXCR4基因转录的抑制率分别为95.67%、85.94%、98.25%。结论:siRNA能够引发人乳腺癌细胞系T47D的CXCR4基因沉默,为进一步探讨CXCR4基因在乳腺癌转移中的作用奠定前期实验基础,也为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。

摘要：目的:探讨一种目前较为新颖的通过Rotor Gene-3000荧光定量PCR仪进行Tm-shifting荧光定量PCR扩增测定单核苷酸多态性(SNP)的可行性。方法:以913份乳腺肿物患者成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)基因rs2981582位点(T→C)作为研究对象,用荧光染料SYBR GreenI标记DNA,并在设计引物时在所研究基因的特异性引物5’末端连接上不同长度的尾,使不同基因型标本的PCR融解曲线的高峰出现在不同位置,最终可通过对PCR融解曲线的分析进行SNP分型测定。结果:纯合子C/C基因型融解曲线峰出现在≤84.60C处,特殊情况下稍向右偏移,但不超过85.10C,峰型较尖。纯合子T/T基因型融解曲线峰出现在≥87.50C处,特殊情况下稍向左偏移,但不小于870C,峰型较尖。杂合子T/C基因型融解曲线峰出现在前两者之间,峰型较平。结论:实验结果表明,用本方法检测大批量人群标本的SNP结果符合遗传平衡定律,且操作简便,检测耗时短,结果特异且费用较为低廉,适合于进行大规模样品的SNP快速测定。