摘要：背景:组织工程皮肤对于大面积皮肤缺损的修复与重建具有重要作用,含有中药的组织工程皮肤支架对于细胞黏附及创面感染控制的作用研究并不多见。目的:利用角质形成细胞与成纤维细胞筛选生肌液应用浓度,观察生肌液-明胶-壳聚糖载药皮肤支架对细胞黏附及生物相容性影响。设计、时间及地点:以角质形成细胞与成纤维细胞为观察对象,随机对照实验,于2005-02/08在天津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成。材料:健康大耳白兔1只,用于获取皮肤种子细胞;生肌液、当归提取液及生地提取液(自行提取,1.5g/mL),明胶-壳聚糖支架及生肌液-明胶-壳聚糖支架由天津大学提供。方法:①以dispaseⅡ-胰蛋白酶-EDTA消化法获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。②实验分为5组,对照组为普通培养液(含体积分数为0.1胎牛血清的基础培养基);生肌液组为含有生肌液质量浓度分别为5,6,8,12g/L的培养液;当归组为含有当归提取液质量浓度为8g/L的培养液;生地组为含有生地提取液质量浓度为8g/L的培养液;表皮生长因子组为含有10μg/L表皮生长因子的培养液;分别用于培养第3代角质形成细胞和成纤维细胞,于1,3,5,7d用MTT法检测细胞的增殖情况。③制备基质中生肌液质量浓度分别为50,60,80,120g/L的载药支架组,将上述细胞在支架上培养,分别于7,14d用半定量方法观察细胞与支架的黏附情况。④60,80g/L载药支架组种植角质形成细胞,分别于4,7,14d取材,进行苏木精-伊红染色和扫描电镜观察。主要观察指标:①生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响。②载药支架对细胞黏附的影响。③细胞与载体的相容性。结果:①MTT检测结果表明,5、6、8g/L的生肌液组细胞增殖较快,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05)。②第3代角质形成细胞与成纤维细胞在60、80g/L的载药支架上可获得较多增殖。③支架上的角质形成细胞形态良好,与支架紧密贴附,药物对细胞无明显毒性作用。结论:生肌液质量浓度为60,80g/L的明胶-壳聚糖载药支架可有效促进角质形成细胞和成纤维细胞的黏附和增殖。

摘要：背景:在皮肤开放创面上进行缺损修复与重建是组织修复领域的研究焦点。构建含有中药的组织工程皮肤修复创面缺损的研究并不多见。目的:将含有生肌液的皮肤支架与自体皮肤细胞复合,构建含药组织工程皮肤,修复兔皮肤缺损。设计:自体对照动物实验。单位:实验于2005-02/08在天津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成。材料:同窝大耳白兔8只,体质量1.6～1.8kg。自行提取生肌液(1500g/L),成分为当归、生地、龟板、象皮、血余、生石膏、炉甘石;明胶-壳聚糖支架材为料天津大学提供,分别修剪成1.3cm直径的圆片,60Co照射灭菌;DR无细胞真皮基质由江苏省启动市医疗用品研究所提供。方法:分离培养兔皮肤细胞,获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。延兔脊柱两侧制作直径1.5cm的圆形全层皮肤缺损创面4个。分为4组,阴性对照组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后滴加生理盐水),人工真皮组(DR无细胞真皮基质贴附于创面后接种细胞悬液),非含药组织工程皮肤组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液),含药组织工程皮肤组(生肌液-明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液)。主要观察指标:①术后13d测量剩余创面面积。②术后7d、10d取材行组织学与免疫组织化学染色检测。结果:①术后13d各组创面面积均有不同程度的缩小,剩余面积阴性对照组>人工真皮组>非含药组织工程皮肤组>含药组织工程皮肤组,非含药组织工程皮肤组、含药组织工程皮肤组与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。②术后10d,阴性对照组、人工真皮组、非含药组织工程皮肤组均有炎性肉芽组织增生,无表皮组织形成;含药组织工程皮肤组形成接近正常的上皮组织及幼稚的真皮组织。非含药组织工程皮肤组与人工真皮组BrdU标记弱阳性,含药组织工程皮肤组BrdU标记强阳性。结论:实验采用的方法使种子细胞在含有生肌液的明胶-壳聚糖支架上增殖,在体修复皮肤损伤,能够有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积,缩短皮肤缺损的愈合时间。