摘要：环介导恒温扩增技术(LAMP)是2000年由日本学者开发的一种新型核酸体外扩增技术。LAMP不仅广泛应用于细菌、病毒、寄生虫等病原微生物检测,而且可以进行单核苷酸多态性分析。LAMP具有灵敏度高、特异性好、可定量分析、反应时间短、操作简单等优点,特别适合在基层实验室推广应用。随着LAMP技术的不断进展,其在标本前处理、引物设计、产物的特异性可视化检测方面也日臻完善。

摘要：目的:研究西藏拉萨地区乙型肝炎病毒基因型的分布与特点.方法:采集92份西藏拉萨地区乙型肝炎患者的血清,参照GenBank中HBV DNA序列设计寡核苷酸探针并制备HBV基因分型芯片,利用套式PCR扩增HBV S基因部分片段,结合基因芯片、DNA测序和BioEdit软件进行基因分型检测,并对其与乙肝标志物、DNA含量、性别和民族之间的关系进行分析.结果:在92例血清标本中,套式PCR检测73例HBV DNA阳性可进行基因分型检测.其中B型13例(17.8%),C型18例(24.7%),D型39例(53.4%)和B/D混合基因型3例(4.1%).统计学分析3种基因型分布在不同乙肝标志物阳性、不同DNA含量和不同性别之间无差异,但与民族存在统计学差异(x^2=7.179,P<0.05).B型以汉族为主(9/13),而C、D型以藏族为主(12/18、28/39).将基因芯片分型的B、C、D型和B/D混合型进行DNA序列分析,表明两种分型方法的结果完全一致.结论:PCR结合基因芯片技术可用于HBV基因分型.西藏拉萨地区HBV基因型包括B、C、D和B/D混合型,其中以D型为主.

摘要：目的建立多重引物高分辨熔解曲线分析(high resolution melting analysis,HRMA)方法并运用该方法筛查两例成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)COL1A1/2的突变基因。方法收集两例OI患者临床资料,采集患者及50例正常对照的血液标本。设计COL1A1、COL1A2基因103个外显子所对应的引物,将满足一定条件的两对引物相互配对,与单份样本DNA混合作为扩增体系。运用HRMA筛查产物突变情况,基因测序确定突变位点。结果本研究中共涉及到COL1A1和COL1A2的103个外显子,其中成功配对39对,未配对成功的有3个COL1A1外显子和22个COL1A2外显子,成功率为75.73%。先证者1筛查结果HRMA熔解曲线在COL1A141号外显子上存在异常,测序结果为c.2877delT杂合突变,即cDNA2877位碱基T缺失,编码的缬氨酸变成色氨酸。先证者2筛查结果HRMA熔解曲线在COL1A116号外显子上存在异常,测序结果为c.1028delC杂合突变,即cDNA1028位碱基C缺失,编码的脯氨酸变成亮氨酸。两种突变类型在中国人群中均未见报道,为新发现的两种剪切突变,且与传统HRMA筛查结果一致。结论多重引物HRMA方法在传统HRMA基础上进行了创新,将两对引物与单份样本DNA混合作为扩增体系,HRMA筛查产物突变情况,且与传统HRMA筛查结果一致,具有一定创新性和可行性,为成骨不全患者基因突变及其他遗传病致病基因的筛查提供了新的思路。

摘要：目的建立布鲁菌的实时荧光环介导恒温扩增(RealAmp)快速检测方法。方法针对布鲁菌属保守基因OMP 25,设计4套引物。通过引物筛选建立RealAmp检测布鲁菌的方法,并对此方法的灵敏度、特异性进行评价。结果该方法对非布鲁菌属标准菌株DNA扩增结果呈阴性,表明实验具有良好的特异性。RealAmp法检测布鲁菌DNA在30 min内即可完成,该方法检测灵敏度可达到1.2×10^-5 ng/μL。结论该研究建立的RealAmp测定方法简便、快速、灵敏,并且不依赖任何特殊设备,有望成为快速检测布鲁菌的新方法。

摘要：目的构建miR-181a真核表达载体,获得食管癌细胞TE11在其中稳定表达的细胞系,为研究miR-181a的功能以及其在食管癌细胞TE11中的作用机制奠定基础。方法根据miR-181a成熟序列在基因组中的位置及其上下游250个碱基序列,以293T细胞基因组DNA为模板设计PCR引物,扩增包含miR-181a前体的序列,连接到线性化的pMD18-TSimple载体中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后亚克隆到pcDNA3.1(+)中,并对重组质粒进行双酶切和测序分析;鉴定完全正确的重组质粒转染食管癌细胞TE11,用G418(350 mg/L)筛选4周获得miR-181a稳定表达细胞系TE11-miR-181a,提取TE11-miR-181a细胞总RNA,用real-time PCR鉴定pcDNA3.1(+)-miR-181a可在真核细胞中稳定过表达。结果成功构建了miR-181a的真核表达载体,并获得了在TE11细胞中稳定表达重组质粒的细胞系TE11-miR-181a。结论 miR-181a真核表达载体在食管癌细胞TE11中稳定高表达,为进一步研究miR-181a在食管癌细胞TE11中的功能及基因调控机制奠定了基础。

摘要：目的研究住院患者Caprini血栓风险模型与9项血浆血栓风险标志物的相关性，评价2种方法诊断静脉血栓栓塞（venousthromboembolism，VTE）风险的价值。方法采用回顾性队列分析研究设计。选择天津医科大学总医院2009--2012年间收治的1066例住院患者，男685例，女38l例，年龄19-81岁。采用ILACLTOP700型血液凝固仪、SysmexCA7000血液凝固仪和Vidas荧光免疫分析仪测定待检者血管性血友病因子抗原含量（vWF：Ag）、凝血因子Ⅶ活性（FVⅡ：A）、凝血因子Ⅷ活性（FⅧ：A）、抗凝血酶活性（AT：A）、蛋白C活性（PC：A）、游离蛋白S含量（FPS：Ag）、纤溶酶原激活抑制物活性（PAI：A）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA：A）、D-二聚体（D-D）水平。采用受试者工作特征（receptoroperatingcharacteristic，ROC）曲线评价血栓风险标志物的诊断效能，采用Spearman相关分析血栓标志物水平与Caprini风险模型的相关性，用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果Caprini风险模型5组间的各项血栓风险标志物水平差异均有统计学意义（D-D、t-PA：A、PAI：A的H值分别为7．530、3．221和4．974，vWF：Ag、FⅧ：A、FⅧ：A、PC：A、FPS：A、AT：A的F值分别为6．395、3．887、4．062、2．905、3．218、5．469，P均〈0．01），且与不同分值Caprini风险模型呈显著相关（D-D、vWF：Ag、FVII：A、FⅧ：A、PC：A、FPS：Ag、AT：A、t-PA：A、PAl：A的r分别为0．805、0．781、0．433、0．509、-0．244、-0．496、-0．263、0．692，P均〈0．01或0．05）。经ROC曲线分析，D-D和vWF：Ag对极高危风险和VTE患者的诊断效能优于其他标志物（D．D敏感度和特异度分别为82．1％和53．9％、94．7％和51．7％；vWF：Ag分别为71．4％和60．9％、81-3％和61．0％）。极高危组（1组与2组）和血浆D．D水平高于临界值（1024gg／L）的患者在30d内有更高的VTE累积风险（Log-rank#分别为65．092和20．785，P均=0．000）。结论9项血栓风险标志物与Caprini风险分层具有相关性，D．D诊断VTE和Caprini极高危风险的效能优于其他8项指标，血栓标志物能敏感反映患者隐匿性凝血紊乱，且与Caprini风险模型在临床应用中具有互补性。

摘要：目的探讨胃癌高发区河西走廊地区患者幽门螺杆菌(Hp)iceA和babA基因型的分布及其与消化道疾病相关因素的关系。方法收集甘肃省第二人民医院、张掖市人民医院、武威市肿瘤医院及金川公司职工医院82例胃镜检查患者的胃黏膜标本、从胃黏膜中分离并培养Hp菌株,设计引物进行PCR扩增及基因型判定,通过病例资料整理,分析Hp菌株中iceA和babA2基因不同基因型与患者临床病理类型、性别和年龄的关系。结果分离Hp菌株并成功扩增73份目的基因,其中HpiceA1型和2型的构成比分别为76.71%(56/73)和23.29%(17/73),babA2基因型为38.36%(28/73)。HpiceA1型在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、消化性溃疡组的患者中的感染率均明显高于iceA2型(P0.05)。消化性溃疡、胃癌患者中babA2型感染率明显高于其他病理组(P0.05)。结论河西走廊地区Hp菌株iceA基因均为阳性并且以1型为主,其分布与患者的疾病类型、年龄相关;babA2基因型感染多与消化性溃疡和胃癌有关。