摘要：目的探索将测序技术应用于缺失型脊髓性肌萎缩症(SMA)基因诊断的可行性。方法设计2对引物,PCR扩增SMA致病基因运动神经元生存基因(SMN1)与其同源基因SMN2之间5个不同碱基所在区域,第1对引物正向扩增SMN1内含子6至7间长度为501 bp片段,包含4个不同碱基位点g.31957、32006、32154及32269;第2对引物反向扩增SMN1外显子8区域,长度为189 bp,包含1个不同碱基位点g.32734。根据测序图谱区分SMA患者与携带者和(或)正常人。将此方法应用于7个临床疑似SMA家系的诊断,并与聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法进行比较。结果 6例测序图谱显示SMN内含子6至外显子8之间5个SMN1和SMN2差异位点g.31957、32006、32154、32269及32734均只有SMN2特有碱基a、T、g、g和A,患儿父母(携带者)相同位点显示为a/g、T/C、g/a、g/a和A/G。说明患者缺失SMN1基因,缺失范围包括内含子6至外显子8;携带者则既有SMN1基因,又有SMN2基因,与患者能区分开。1例检测结果为a、T、g、g和A/G,说明其缺失范围不含外显子8。测序法与PCR-RFLP方法结果一致。结论测序技术在缺失型SMA患者的基因诊断上优于经典PCR-RFLP法,更方便快捷,结果更明确,建议替代常用的PCR-RFLP法。

摘要：目的探讨利用高分辨熔解曲线技术对21羟化酶缺乏症患者中致病基因热点突变筛查的可行性及临床应用价值。方法针对CYP21A2基因上的4个热点突变c.293-13A/C>G(I2G)、c.518T>A(p.I173N)、c.955C>T(p.Q319X)及c.1069C>T(p.R357W)设计相应的特异性引物,应用高分辨熔解曲线技术进行分析,并结合DNA测序技术进行验证。结果高分辨熔解曲线技术能对CYP21A2基因上的该4个热点突变明确分型,且与基因序列测序结果比对准确性良好;对基因突变型标本进行3次重复检测,Tm值变异系数为0.168%~0.620%。结论高分辨熔解曲线检测技术可用于健康人群或高危人群CYP21A2基因热点突变的筛查,是一种高效、准确、低成本的筛查方法,具有一定的临床应用价值。

摘要：目的调查国内儿童急性呼吸道和消化道感染中是否存在脑心肌炎病毒（EMCV）感染。方法对2013年1月至12月天津市儿童医院收集的577份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物和384份消化道感染患儿粪便标本，以针对EMCV5’-UTR基因序列设计的特异性引物进行荧光定量PCR扩增，随机挑选阳性扩增产物进行核苷酸序列测定，并将所测序列在GenBank中进行比对。同时对所有标本进行其他多种呼吸道、消化道相关病毒检测。采用直接免疫荧光测定法检测7种常见呼吸道病毒；金标法检测轮状病毒、腺病毒；酶标法检测星状病毒；PCR方法检测鼻病毒、多瘤病毒wu、多瘤病毒Kl、人博卡病毒、诺如病毒、肠道病毒、Aichi病毒及双埃可病毒；实时荧光定量PCR法检测心病毒。结果577份鼻咽抽吸物标本检测出7例EMCV阳性，阳性率为1．2％。患儿年龄均在6个月以内，检出季节为秋季和冬季；384份粪便标本检测出11例EMCV阳性，阳性率为2．9％。患儿集中在1岁以内及4—7岁，除春季外，其他3个季节均有检出。阳性患儿呼吸道及胃肠道症状以发热、腹泻为主，与其他呼吸道及肠道病毒感染类似。88．9％（16／18例）的患儿居住在郊县和农村。其中5例样本存在与合胞病毒、腺病毒、心病毒和诺如病毒的混合感染。混合感染患儿性别、年龄、住院时间、病情严重程度与单纯EMCV感染患儿相比，均无明显差异。结论中国儿童存在EMCV感染，与呼吸道和消化道感染相关，需进一步检查其他感染是否与EMCV有关。

摘要：目的探讨学龄儿童眼球生物参数变化与近视发展特点。设计回顾性队列研究。研究对象6~7岁学龄儿童167例（167眼）。方法 167例儿童3年2次（2011年、2014年）行眼球生物参数与屈光度检查。根据检查结果（取右眼数据）,分为非近视组（2011年与2014年检查均未确定为近视）,新增近视组（2011年检查未近视,2014年检查确定近视）,近视组（2011年与2014年检查均确定为近视）。采用配对样本t检验比较各组参数变化,组间比较采用方差分析。主要指标等效球镜（SE）、眼轴长度（AL）、角膜曲率半径（CR）、中央角膜厚度（CCT）、前房深度（ACD）、晶状体厚度（LT）、轴率比（AL/CR）等。结果非近视组105眼2011到2014年SE、CR变化差异无统计学意义（t=0.86、-1.75,P=0.36、0.084）,AL、CCT、ACD、LT、AL/CR变化差异有统计学意义（t=-19.84、-2.28、-13.94、9.81、-8.18,P=0.000、0.025、0.000、0.000、0.000）。新增近视组45眼2011到2014年CR变化差异无统计学意义（t=-1.68,P=0.099）,SE、AL、CCT、ACD、LT、AL/CR变化差异有统计学意义（t=13.09、-15.54、3.37、-15.30、11.16、-61.90,P=0.000、0.000、0.002、0.000、0.000）。近视组17眼2011到2014年CR变化差异无统计学意义（t=-0.35,P=0.733）,SE、AL、CCT、ACD、LT、AL/CR变化差异有统计学意义（t=4.30、-10.70、-2.43、-3.746、4.439、-7.95,P=0.01、0.000、0.027、0.002、0.000、0.000）。3组间2011年SE、AL、ACD、LT、AL/CR比较差异均有统计学意义（F=46.14、8.89、9.29、4.47、11.76,P=0.000、0.000、0.000、0.013、0.000）,非近视组与新增近视组两两比较LT有显著差异;2014年SE、AL、ACD、LT、AL/CR组间比较差异均有统计学意义（F=134.85、24.77、11.17、6.63、41.08,P=0.000、0.000、0.000、0.002、0.000）。结论三年随访观察显示,此年龄段儿童眼球生物参数变化显示SE降低、AL增长、CCT变厚、ACD加深、LT变薄、AL/CR增大等特点,而CR无明显变化。LT可能是近视发生的预警信号之一。

摘要：目的调查天津地区儿童急性呼吸道和消化道感染中是否存在Saffold病毒(SAFV)感染及其流行病学特征。方法收集360份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物和384份消化道感染患儿粪便标本,以针对SAFV 5′-UTR基因序列设计的特异性引物进行荧光定量PCR扩增,随机取阳性扩增产物进行核苷酸序列测定,并将所测序列在Gen Bank中进行比对。计算呼吸道和消化道SAFV感染阳性者的阳性率,不同年龄段及季节的SAFV阳性构成比和阳性检出率。同时考察SAFV与其他病毒的混合感染情况。结果呼吸道和消化道检测SAFV阳性率分别为11.9%(43/360)和16.4%(63/384)。不同性别的呼吸道SAFV阳性检出率差异无统计学意义[男、女分别为11.5%(28/243)和12.8%(15/117),χ2=0.13,P>0.05],年龄6 d^12岁,<1岁者占79.0%(34/43);消化道检测SAFV阳性患儿阳性检出率差异有统计学意义[男、女分别为13.4%(33/246)和21.7%(30/138),χ2=4.47,P<0.05],年龄5 h^11岁。不同年龄段的呼吸道和消化道SAFV阳性检出率差异均无统计学意义。不同季节呼吸道SAFV阳性检出率差异有统计学意义,以冬季和夏季为主(P<0.01),而消化道SAFV阳性检出率差异无统计学意义。呼吸道和消化道SAFV与其他病毒混合感染率分别为7.0%(3/43)和12.7%(8/63)。结论天津地区儿童存在SAFV感染,在急性呼吸道和消化道感染患儿中具有较高的阳性检出率,且在1岁以内患儿中的阳性检出率较高,应该引起临床重视。