摘要：将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法。针对布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针。生物素标记LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交,杂交产物经LFD检测。优化后的扩增温度和时间为63℃反应50 min,加上样品的前处理,完成检测仅需80 min。LAMP-LFD方法可特异性地检出布鲁氏杆菌,其最低检测限为5.4×100CFU/mL,是利用外引物建立的PCR方法的100倍。试验结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测布鲁氏杆菌;简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断;适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。

摘要：研究针对布鲁杆菌保守的OMP25基因设计了4条LAMP的特异性引物,通过优化反应条件,建立了布鲁杆菌的LAMP快速检测方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测布鲁杆菌,其最低检测限为5cop-ies/μL。扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳、显色反应进行判定。LAMP可以快速、直观、准确地检测布鲁杆菌,是一种适合基层现场应用的检测方法。

摘要：随着抗生素大量而广泛的使用,细菌的耐药性已成为世界范围内关注的问题,对细菌携带耐药基因的检测已成为生物安全调查评估的新途径。本实验应用PCR方法扩增新霉素耐药基因aph,将其克隆于p EASY-T1载体并测序。通过Genbank同源性比较,在aph基因保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,建立了耐新霉素aph基因的LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8 mol/L,Mg2+浓度为20 mmol/L,反应温度63℃,时间50 min。此方法可在60 min左右完成对aph基因的检测,特异性好。应用系列稀释的aph基因质粒进行敏感性检测比较,结果表明aph基因的LAMP检测灵敏度与PCR相当,检测限约20个拷贝。对38株葡萄球菌分离株的aph基因的LAMP检测表明,aph基因阳性携带率为84.2%。

摘要：为了猪肉安全生产的监管和满足食品消费者的知情权,保障猪肉食品的公共安全,论文采用标识技术、PDA移动智能识读技术、GPRS技术和Internet等技术,结合中国"畜禽标识及养殖档案管理办法",提出了猪只散养模式下养殖过程信息的采集技术方案,设计了散养模式下养殖过程信息的元数据结构及相应的mobile数据表,开发了猪只移动养殖环节数据采集记录与传输的嵌入式系统,与面向政府监管和消费者查询的公共网络平台实现了移动互联。所开发的移动系统能够实现猪只耳标的移动识别、包括饲料、兽药使用和违禁药品监测等各种事件的移动记录,及时向溯源数据库移动系统提交出栏猪只的养殖数据,同样可远程维护散养猪只的养殖档案数据,最终实现散养模式下从生产源头到消费终端的跟踪和溯源。该移动数据采集系统,解决了中国养猪业主体模式——农户散养模式下猪只养殖电子档案建立的难题,并经在天津猪肉质量溯源体系中的实际应用证明是可行的,个别技术瓶颈随通讯技术的发展将得到解决,其全面实施将为保证中国农户养殖模式下生猪及其产品溯源体系与制度的建设提供技术支撑。

摘要：为建立一种快速、便捷的单增李斯特菌检测方法,本研究针对单增李斯特菌hlyA基因设计了4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的探针,采用环介导等温扩增(LAMP)与横向流动试纸条检测技术(LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的单增李斯特菌LAMP-LFD检测方法。通过对其反应条件进行优化,结果显示,优化后的扩增温度和时间为63℃反应50 min,完成检测全过程仅需80 min。该方法仅可以特异性地检出单增李斯特菌,而对其它6种常见食源性致病菌的检测均呈阴性。对纯细菌培养物的检测灵敏度为3.6 cfu/m L,是利用外引物建立的PCR方法的100倍。该方法重复性好。对15份牛奶和15份猪肉的细菌分离鉴定和LAMP-LFD检测表明,二者符合率为100%。研究结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测单增李斯特菌,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。

摘要：试验采用2(粗蛋白)×3(非植酸磷)×2(植酸酶)因子安排的完全随机试验设计,试验品种为海兰褐商品蛋鸡,年龄为32周龄,试验持续时间为4周,鸡的数量为432只,试验分成12组,每组6个重复,每个重复6只鸡。基础日粮为玉米—豆粕型。试验研究饲粮粗蛋白、非植酸磷水平和植酸酶对蛋鸡生产性能的影响。结果表明:饲粮粗蛋白质、非植酸磷水平和植酸酶等因素间对产蛋鸡的产蛋率、平均蛋重、产蛋量没有显著影响(P>0.10)。饲粮中添加植酸酶可显著提高产蛋鸡的产蛋率和产蛋量。