摘要：目的构建一种高效"沉默"碱性成纤维细胞生长因子的小干扰RNA重组腺病毒载体,并为该载体在基因研究中提供相关资料。方法设计、合成优选的靶向bFGF特异性siRNA序列。采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将bFGF-siRNA序列克隆至腺病毒穿梭质粒pGStrack上,然后将重组穿梭质粒pGStrack-bFGF-siRNA和腺病毒骨架质粒pGSadeno体外LR位点进行特异性重组,将bFGF-siRNA基因转移至腺病毒骨架质粒pGSadeno上,最后重组骨架质粒pGSadeno-bFGF-siRNA。鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA。同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测腺病毒滴度,用Western blot方法验证所构建载体作用效果。结果 PCR鉴定重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA构建成功;扩增后检测腺病毒滴度约为5×108 PFU/ml,Western blot结果显示目的基因蛋白沉默效率大于90%。结论应用LR重组法能成功构建携带靶向bFGF基因的siRNA重组腺病毒,该载体转染胶质瘤U251细胞株后目的基因蛋白沉默效率较高,为进一步的相关研究奠定可靠的基础。

摘要：纪实摄影作为一种新闻记录、传播、宣传的重要渠道和手段,见证了社会的变迁和时代的进步。不同于其他摄影艺术,作为我国新时代文化建设的重要组成部分,新闻纪实摄影与我们日常生活息息相关,其价值不仅仅在于图像本身,而是作为一种媒介折射整个社会的意识形态,通过不经意的瞬间反应时代的变革,将瞬间变成永恒,将点滴写入历史。社会的变迁为新闻摄影在内容上带来了变化,而数字化信息技术的普及也为纪实摄影的记录手段与方法带来了前所未有的机遇与挑战。随着信息技术的革命,我国的科学技术得到了迅猛的发展,尤其以电子计算机技术引领的新科技革命在各行各业都产生了强大而深远的影响。一方面新的数字化技术的发展为新闻摄影在艺术性上提供了巨大的空间,同时也在真实性上提出了巨大的挑战,迫使广大的新闻传播工作者反思传统的审美理论和职业标准;另一方面新闻摄影的平民普及化也为摄影艺术和新闻传播的多样性提供了更多的可能性。

摘要：无细胞表达蛋白质体系近年来恢复活力,以满足日益增长的蛋白合成需求.与传统的细胞重组表达蛋白的方法相比,无细胞体系具有许多优点,包括更快的速度、更高的通量和更大的灵活性.此外,它提供了独特的可能性,如合理的DNA模板设计,毒素蛋白的表达,多个多肽链的联合表达,高效的定位标记等等.在本文中,建立了一个linker-tRNA的方法利用无细胞体系固相合成蛋白质.首先,需要将第1个氨基酸连接上起始tRNA通过linker连接到固相表面.为了提高固相合成蛋白质的效率,利用含有琥珀终止子(CUA)为反密码子的linker-tRNA与含互补琥珀子(UAG)为起始密码子的DNA模板而不是正常的起始密码子(密码子AUG).已经成功地获得了纯化的fma-tRNA(-CA)和linker-Met了.此方法将为蛋白质芯片的开发提供新途径.