摘要：我们通过对TA2小鼠原位接种MA737乳腺癌的方法，动态观察不同时期原位微环境与肿瘤侵袭的变化规律。采用免疫组化S－P法定性定位分析微环境中诱发因子VEGF、第八因子相关抗原与肿瘤增殖侵袭的相关性。从而揭示肿瘤原位微环境在乳腺癌生长起始阶段的作用。1 材料与方法1．1 肿瘤模型可移植性MA737乳腺癌模型引自天津医科大学实1．2 实验动物验肿瘤室。中国医学科学院肿瘤所提供TA2纯系雌性小鼠，8周龄，体1．3 实验设计重平均22g。接种传代的MA737瘤株来自无菌条件下取得新鲜癌组织，剪成1mm3小块，置于含1640培养液平皿中，分别将1mm3瘤组织小块接种于40只小鼠下腹左侧乳腺区域，而后逐日解剖（2～3只／天）行病理组织学、免疫组织化学检测。1．4 实验试剂VEGF多克隆抗体购自北京中山试剂公司，第八因子相关抗原购自DAKO试剂公司，S－P试剂盒购自福州迈新试剂公司。1．5 结果判定1微血管密度MVD分析：计数肿瘤间质微血管密度最大的区域内的微血管数目参照Weidner标准在200倍视野下行人工计数。每例切片先后两次计数，然后求其平均值。2VEGF的表达...

摘要：目的 :为改善鼻咽癌原发或复发灶的局部控制。方法 :新型鼻咽癌施源器完全适合于鼻咽腔的形状 ,先制成一个塑料模体 ,有两根管附在它的背面 ,紧贴鼻咽穹窿 ,模体腹面有一凸起可推开软腭 ,使其远离两根施源管。结果 :新的鼻咽癌施源器操作简便 ,患者无痛苦。剂量分布合理 ,临床疗效满意。结论 :新型鼻咽癌施源器的设计应用及临床效果 ,在提高靶区剂量改善局部控制的同时降低了正常组织放射剂量 ,值得进一步临床推广应用。

摘要：目的观察小干扰RNA（siRNA）抑制二磷酸腺苷（ADP）核糖化因子鸟苷酸激酶1基因（ASAP1）表达对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的影响。方法设计合成靶向ASAP1基因的siRNA，采用阳离子脂质体试剂瞬时转染膀胱癌细胞株T24，利用实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）和Western blot检测RNA干扰（RNAi）后ASAP1基因的沉默效果，评价siRNA设计的合理性及RNAi抑制ASAP1表达的有效性，分别在RNAi后1、2、3d应用噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞增殖状态，并绘制生长曲线；应用Transwell法检测各实验组膀胱癌细胞的侵袭能力。结果靶向ASAP1的siRNA成功抑制膀胱癌细胞株T24中ASAPlmRNA及蛋白表达，ASAPI—siRNA组mRNA相对表达量为空白对照组的13．5％，蛋白相对表达量为对照组的14．3％；MTT比色法结果显示ASAPI—siRNA组细胞增殖能力显著减弱（P〈0．05），在1、2、3d后重复检测，分别达到了同时间空白对照组的76．3％、59．1％和51．4％；Transwell小室迁移实验结果表明，ASAPl被抑制后，膀胱癌穿膜细胞数明显减少[（49．5±10．4）个比（122．6±14．2）个，P〈0．05]，侵袭能力降低。结论应用siRNA技术能有效抑制ASAP1基因的表达，同时有效抑制T24细胞的体外增殖和侵袭能力。

摘要：目的:初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法:采用免疫组织化学方法检测112例肺癌(包括鳞状细胞癌65例,腺癌47例)组织中CAR的表达情况,利用统计学方法(SPSS10.0软件)分析CAR的表达在鳞状细胞癌、腺癌以及癌旁正常肺组织中有否差异。结果:正常肺组织中仅有少量CAR的表达。两类型肺癌分别与癌旁组织CAR的表达差别有统计学意义(P0.05)。此外,我们发现在肺腺癌中所包含的细支气管肺泡癌部分几乎都有CAR的表达。结论:肺癌组织(鳞状细胞癌和腺癌)CAR的表达普遍提高,提示CAR与肺癌的发生、发展有一定的联系,并且与肺腺癌的形成及发展的关系更为密切,因此为进一步实现用腺病毒载体对肺癌进行基因治疗提供了理论基础。

摘要：背景:端粒酶反转录酶是端粒酶的活性亚基,已成为肿瘤研究的热点。RNA干扰技术作为一种基因沉默方法,具有高效、特异等优点,现已广泛应用于肿瘤、病毒等研究领域。目的:构建针对人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,并观察其对乳腺癌T47D细胞人端粒酶反转录酶基因的表达和端粒酶活性的影响。方法:以Genbank中人端粒酶反转录酶基因的mRNA序列为基础,设计人端粒酶反转录酶基因的小干扰RNA序列,将其连接到具有G418抗性的质粒pBAsi-hU6-Neo(BamHⅠ/HindⅢ)中,应用基因测序加以验证,扩增提取质粒,以脂质体转染表达小发夹RNA的质粒到乳腺癌T47D细胞,抗生素G418筛选出转染成功的各组细胞。结果与结论:实验所构建的人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,经测序验证无误。将pBAsi-hU6-Neo重组质粒转染入T47D细胞,经G418筛选获得了转染成功的细胞。经RT-PCR和Western blot检测,转染后的人端粒酶反转录酶基因在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低(P<0.01),经TRAP-ELISA法检测实验组细胞端粒酶活性出现显著下降(P<0.01)。结果证实,实验成功构建人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,实验所设计的小干扰RNA能有效抑制肿瘤细胞人端粒酶反转录酶基因的表达,进而降低细胞的端粒酶活性。

摘要：目的:建立基于微流控细胞芯片技术分析CD14+单核细胞髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的方法,初步探讨急性粒-单核细胞白血病(M4)患者CD14+单核细胞的MPO表达。方法:以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为基质材料,二次模塑成型工艺制备微流控细胞芯片。选取临床诊断M4患者48例,骨髓象大致正常患者52例作为对照组。设定微流控芯片检测单核细胞MPO方法,测定细胞MPO阳性率和程度。应用微流控细胞芯片法分析M4患者和对照组CD14+单核细胞的MPO表达。结果:设计微流控单细胞分析芯片,粒细胞能够进入相应微流控通道,可分离血细胞,但是白细胞周围存在影形细胞现象,而细胞形态未见有明显改变。M4患者骨髓细胞CD14+单核细胞MPO阳性率和活性明显高于对照组(P<0.05)。结论:应用微流控单细胞技术分析CD14+单核细胞MPO表达,结果显示M4患者CD14+单核细胞MPO活性明显高于对照组,有可能作为辅助检查标志物。

摘要：天津市肿瘤医院、天津市肿瘤研究所原有的动物实验室是利用研究所楼内的普通房间在 80年代中期临时改建的。房间面积窄小 ,设施条件差 ,通风不良 ,动物室与实验室也极不配套 ,达不到等级实验动物设施的要求。由于动物实验条件所限 ,很多科研项目不得不暂停下来或者改变计划 ,这种情况严重制约并影响了我所科研工作。为了更好地贯彻落实国家《实验动物管理条例》和卫生部《医学实验动物管理实施细则》 ,促进我院医疗、教学、科研、预防工作的全面发展 ,我所实施了实验动物室清洁级设施改建工程。我所改建的实验动物设施是在原有动物室的基础上 ,增加了面积、使用功能和等级条件。按设计的指导思想和原则 ,使整体条件达到了清洁级水平。1　区域设置　　我所改建的实验动物设施基本上是在原有的动物室基础上 ,增加面积、使用功能和等级条件。1 1　前　区 :外走廊、库房、办公室。1 2　后勤区 :洗刷室、消毒室、淋浴室。1 3　动物实验区　　 (1 )饲育 (一 )、(二 )室 :缓冲间、清洁更衣室、饲育室。(2 )裸鼠室 :缓冲间、清洁更衣室、裸鼠实验室。(3)实验 (一 )、(二 )室 :缓冲间、清洁更衣室、实验室。(4)大动物实验室 :...

摘要：目的:克隆血管内皮生长因子C(VascularEndothelialGrowthFactorC)功能片段的cDNA,构建人VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用。方法:根据人VEGF-CcDNA序列,设计合成二对特异性引物,第一对5'端含有EcoRⅠ及第二对3'端含有XhoⅠ酶切位点。运用RT-PCR法克隆人MDA-MB231中的VEGF-CcDNA部分编码序列(CDS);经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5α中扩增,纯化。通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定。结果:用RT-PCR克隆到VEGF-CcDNA部分CDS;PCR和双酶切鉴定阳性重组子,显示有人VEGF-CcDNA编码序列,基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF-C序列正确。结论:从富含VEGF-C的人MDA-MB231细胞系中克隆得到的VEGF-C基因功能片段cDNA,成功构建了人真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C。

摘要：雌激素受体是核受体超家族中重要的一员，其与雌激素的结合在人类组织器官发育、新陈代谢以及许多疾病的发生和发展中起着重要的作用。协同调节因子是雌激素．雌激素受体信号转录传导途径中的一类重要调节分子，它们可以与雌激素受体直接结合，并作为协同激活因子上调或作为协同抑制因子降低雌激素受体的基因转录功能。蛋白分子结构分析发现，在协同调节因子与雌激素受体的相互作用中，其蛋白序列中含有的一段非常保守的富含亮氨酸的螺旋序列LXXLL模序（L指亮氨酸、x指任意氨基酸）扮演着重要角色，并在辅调节因子，特别是在协同激活因子中广泛地存在。深入研究DXXLL模序与雌激素受体相互作用的分子机制不仅有助于对LXXLL模序在雌激素受体．辅助调节因子蛋白之间相互作用中地位的理解，也为针对LXXLL模体与核受体的作用位点设计新的靶向药物奠定了基础。因此，该文简述了LXXLL模序在雌激素受体协同调节因子中存在的广泛性、LXXLL模序与雌激素受体相互作用的机制以及其在新药设计上的应用等相关方面的研究进展。

摘要：目的采用随机化试验评价补硒对慢型克山病(CKD)心力衰竭进展的影响。方法采用随机、对照、双盲的试验设计,将139例CKD患者分为试验组和对照组,分别为71例和68例。试验组每天口服200μg硒酵母胶囊,对照组口服等量不含硒的酵母胶囊。随访观察9个月,采血检测全血硒(Se)、血清脑钠肽(BNP)、基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血浆内皮素(ET)含量。研究终点是全因死亡。所有分析均采用意向性分析。结果干预9个月后,试验组全血Se显著高于对照组(P0.05)且病人的生存率均随时间推移呈下降水平,但大约补硒140 d后,试验组的生存状态开始好于对照组。结论9个月补硒对CKD病人心力衰竭和生存期未见有统计学意义的改善。