摘要：目的:骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一。实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础。方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成。①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司);pTA2?-T Easy(鼎国生物技术有限公司)。②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定。结果:①聚合酶链反应获得长度约1216bp的目的片段,与预期片段相符。②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配。结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体。

摘要：[目的]检测酪氨酸蛋白激酶EphB4受体在不同癌组织中的表达情况,探讨其与恶性肿瘤形成的关系。[方法]从各组织中提取总RNA,设计目的基因引物和内参照GAPD引物。采用RT-PCR方法,分别检测胃癌、结肠癌、肺癌、肝癌、腹壁癌5种肿瘤组织及相应邻近正常组织中EphB4受体的表达,应用Bio-RAD凝胶成像系统及在Quantity One软件辅助下分析测定表达结果。[结果]EphB4在5种癌组织中均有表达,以胃癌组织中表达最高,其余依次为结肠癌、肺癌、肝癌、腹壁癌。在正常组织中未见表达。[结论]酪氨酸蛋白激酶 EphB4受体在恶性肿瘤的发生中扮演重要角色。

摘要：背景:腺病毒虽可携带骨诱导形成蛋白2基因转染靶细胞促进其分泌诱导形成蛋白2,但容易出现一些免疫应答反应,以质粒为载体的转染实验应具有良好的前景。目的:验证构建绿色荧光蛋白标记的人骨诱导形成蛋白2真核表达载体的可行性。设计:单一样本观察。单位:天津医院。材料:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室(国家级)完成。含完整hBMP2基因片段的pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2质粒由李曦铭博士惠赠。双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS为Invivogen公司产品,Zeo购自Invivogen公司。pTA2-TEasy为鼎国生物技术有限公司产品,限制性内切酶BamHI和NheI、T4DNA连接酶(晶美生物工程有限公司),PCR上下游引物合成及测序(北京奥科生物技术有限责任公司)。方法:以重组质粒pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法亚克隆出人骨诱导形成蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-人骨诱导形成蛋白2。主要观察指标:采用PCR法鉴定人骨诱导形成蛋白2序列,同时进行酶切及测序鉴定人骨诱导形成蛋白2是否克隆入pTA2-人骨诱导形成蛋白2重组质粒及真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS中。结果:PCR获得长度约1216bp的目的片段,经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的BMP2cDNA序列(NM-001200)100%匹配。结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体。

摘要：组织芯片又称组织微阵列，是将数百个组织按预先设计的需要在某种载体（如载玻片、尼龙膜片等）上排列成矩阵的缩微组织切片。组织芯片具有平行、高通量对组织进行分析研究，节约组织原材料和检测试剂，且由于实验条件一致而减小实验误差。由于其操作简单，应用广泛，近年来发展迅速。它是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本，并按次序排列在一个新的石蜡块上，制作成HE切片，然后按研究的需要进行免疫组化及原位杂交等研究。组织芯片技术最重要的特点是：一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破坏很小。除此之外，它还可以进行组织切片的精确定位和多种类型的分子生物学分析。作为一门新技术，使用组织芯片仪构建组织芯片的过程中有许多关键环节。忽视这些环节，必将影响组织芯片仪的使用寿命和组织芯片的质量。